产漆酶菌株的筛选与酶活性的测定论文.doc

产漆酶菌株的筛选与酶活性的测定目录TOC\o"1-3"\h\uHYPERLINK\l_Toc20304摘要PAGEREF_Toc20304IHYPERLINK\l_Toc11274AbstractPAGEREF_Toc11274IIHYPERLINK\l_Toc22813前言PAGEREF_Toc228131HYPERLINK\l_Toc168451材料与方法PAGEREF_Toc168452HYPERLINK\l_Toc191881.1实验材料与方法PAGEREF_Toc191882HYPERLINK\l_Toc279121.2培养基PAGEREF_Toc279123HYPERLINK\l_Toc308851.3实验方法PAGEREF_Toc308853HYPERLINK\l_Toc166291.3.1产漆酶菌株的筛选PAGEREF_Toc166293HYPERLINK\l_Toc93431.3.2漆酶液态发酵及其制备PAGEREF_Toc93433HYPERLINK\l_Toc27172漆酶酶活性的测定PAGEREF_Toc27174HYPERLINK\l_Toc49912.1ABTS-分光光度计法PAGEREF_Toc49914HYPERLINK\l_Toc160902.2分光光度法具体步骤PAGEREF_Toc160904HYPERLINK\l_Toc173332.3酶活性的计算PAGEREF_Toc173334HYPERLINK\l_Toc219053菌株的活化PAGEREF_Toc219054HYPERLINK\l_Toc243573.1培养基及主要试剂的配置PAGEREF_Toc243574HYPERLINK\l_Toc255053.2菌种活化步骤PAGEREF_Toc255055HYPERLINK\l_Toc57484改良CTAB法提取待测菌株全基因组PAGEREF_Toc57485HYPERLINK\l_Toc44364.1基因组提取PAGEREF_Toc44365HYPERLINK\l_Toc107755结果与分析PAGEREF_Toc107756HYPERLINK\l_Toc146826讨论和小结PAGEREF_Toc146829HYPERLINK\l_Toc240311.讨论PAGEREF_Toc240319HYPERLINK\l_Toc73152.小结PAGEREF_Toc73159HYPERLINK\l_Toc12831参考文献PAGEREF_Toc1283110HYPERLINK\l_Toc14643致谢PAGEREF_Toc1464311PAGE\*MERGEFORMAT摘要本实验从南昌农药厂土壤中分离筛选出一株能够产漆酶活性的细菌菌株，并初步分析和鉴定了该菌株。此菌株具有生长快速、遗传稳定、菌落规则的特性。为了从土壤中筛选产漆酶酶活相对较高的菌株，采用以愈创木酚为底物，利用平板筛选法和定性测定酶活力法筛选得到高产漆酶菌株。以ABTS〔2,2’-连氮基-双（3-乙基苯丙噻唑啉-6-磺酸）〕为底物测定漆酶活得到产漆酶活性的菌株，菌株的产酶高峰期出现在发酵培养基培养后的第6天，最高的产漆酶活为5.33U。通过测序和序列比对得到此菌株为溶血葡萄球菌JCSC1435（hemolyticStaphylococcusJCSC1435）。适宜的发酵培养基为：葡萄糖2%，酒石酸铵1%，磷酸二氢钾0.2%，七水硫酸镁0.05%，无水氯化钙0.0075%，五水硫酸铜0.001%。适宜的培养条件：50ml/250ml发酵培养基，培养温度为28℃，转速为200r/min，培养时间为7d。关键词：漆酶、愈创木酚、溶血葡萄球菌JCSC1435PAGE\*MERGEFORMATIAbstractThecollectedsoilfromthepesticidefactoryinNanchangasmaterial,andin2014JulytoSeptember,toisolateabacterialstrain,rapidgrowth,geneticstability,withtheactivityoflaccase,andthephysiologicalandbiochemicalpropertiesofthestrainwerestudied.Inordertoselectthelaccaseenzymeactivity