浅论白藜芦醇诱导大鼠原代脂肪细胞凋亡及机制.docx

浅论白藜芦醇诱导大鼠原代脂肪细胞凋亡及机制【摘要】【目的】探讨白藜芦醇(Res)对大鼠原代脂肪细胞凋亡的影响及其机制。【方法】培养大鼠原代脂肪细胞，添加不同剂量的Res干预，用Hoechst33258染色，在荧光显微镜下观察细胞核形态;用DNALadder实验观察DNA断裂的条带;检测各组培养基和细胞内的乳酸脱氢酶(LDH)含量，计算LDH漏出率;用流式细胞仪测定细胞凋亡率;Westernblot检测相关位点，包括沉默信息调节因子1(Sirt1)、细胞色素C(CytochromeC)、半胱天冬氨酸酶家族(Caspase9和Caspase3)的蛋白质表达。【结果】经过Res干预后，细胞核染色质高度凝集，电泳后出现180～200bp整数倍的寡核苷酸片段。细胞LDH漏出率升高，呈剂量-反应关系(P或P)。Res作用后细胞凋亡率明显上升，呈剂量-反应关系(P)。Sirt1、CytochromeC、活化的Caspase9及Caspase3表达水平上升，胞浆CytochromeC释放也增加。【结论】Res促进原代脂肪细胞凋亡，其机制可能是通过增加Sirt1表达，经由线粒体凋亡途径，作用于Caspase9和Caspase3。【关键词】白藜芦醇;凋亡;沉默信息调节因子1;细胞色素C;半胱天冬氨酸酶Abstract：【Objective】Toexploretheeffectandmechanismofresveratrol(Res)onapoptosisofratprimaryadipocytes.【Methods】Ratprimaryadipocyteswereculturedandtreatedwithresveratrolindifferentdosages.AdipocyteswerestainedbyHoechst33258，andcellmorphologicaltransformationwasexaminedwithfluorescentmicroscope.DNALadderassaywasusedtofurtherconfirmcellapoptosis.TheLDHcontentinmediumandcellswasmeasuredtocalculatetheLDHleakingratio.Thenumberofapoptoticcellswereassayedwithflowcytometry.Theexpressionofsilentinformationregulator1(Sirt1)，CytochromeC，CleavedCaspase9，CleavedCaspase3wereexaminedusingWesternblot.【Results】Resinducedtheapoptosisofratprimaryadipocytesinadosedependentmanner.NuclearfragmentationandcondensationwereobservedbyHoechst33258stainingandDNALadderassay.ResalsoincreasedtheLDHleakingratio，thenumberofapoptoticcellsandtheexpressionlevelsofSirt1andCytochromeC，CleavedCaspase9，CleavedCaspase3.【Conclusion】Rescouldinducetheapoptosisofratprimaryadipocytes.TheunderlyingmechanismsmaybeenhancingexpressionofSirt1，CytochromeC，CleavedCaspase9andCleavedCaspase3whicharerelatedtocellapoptosis.既往研究认为，肥胖的形成与脂肪的合成或分解代谢紊乱密切相关，而新的研究显示，前脂肪细胞或脂肪细胞的凋亡，对于减少机体过度的脂肪堆积，改善胰岛素抵抗状态及预防与治疗代谢综合征都具有实际意义[1]。白藜芦醇(Resveratrol，Res)是一种多酚类化合物，存在于多种天然植物如葡萄、虎杖中，在新鲜葡萄皮中含量最高。Res有广泛的生物学功能，在机体中有包括抗癌、抗炎症、保护心血管系统、清除自由基、改善胰岛素抵抗和抑制血小板凝集等作用。研究发现，Res可以抑制多种癌细胞的增殖，并且促进其凋亡，具有肿瘤化学预防的作用。然而，目前有关Res对脂肪细胞凋亡作用的研究仍相对较少。沉默信息调节因子1(Silentinformationregulator1，Sirt1)是一种去乙酰基酶，在细胞凋亡过程中起重要作用。有研究发现，Res可以通过增加S