浅论烫伤应激对大鼠结肠胆碱能和CO能神经的影响.docx

浅论烫伤应激对大鼠结肠胆碱能和CO能神经的影响【摘要】目的：探讨烫伤后大鼠肠功能障碍时肌间神经丛有无形态学异常及可能机制。方法：20只大鼠随机分成对照组和烫伤组，建立30%TBSAIII度烫伤大鼠模型，测定肠传输速率，用酶组织化学方法观察结肠肌间神经丛内胆碱能和CO能神经的组织学改变，并对两组大鼠结肠肌间神经丛内乙酰胆碱酯酶和血红素氧合酶-2阳性神经元、神经节的密度进行了测定。结果：烫伤组大鼠肠传输速率明显降低。烫伤后大鼠结肠肌间神经丛内胆碱能神经元及神经节密度明显减小andcontrolgroup.Therateofenterictransitwasmeasuredandthechangesofacetylcholineandcarbonmonoxideproducingneuronsincolonofscaldedratwereobservedaswell.Results:Inthescaldedgroup，therateofenterictransitwasdelayed，thenumberofacetylcholineandcarbonmonoxideproducingneuronsinmyentericplexusofratduodenumweresignificantlydecreased(P，P)comparingwithcontrolgroup.Conclusion:Thechangesofacetylcholineandcarbonmonoxideproducingneuronsinmyentericplexusofratcolonmaybecloselyrelatedtotheintestinaldysfunctionduringearlypostburnstage.Keywords:burns；cholinergicnerves；hemeoxygenace-2nerves；rat严重烧伤后患者伴有消化系统功能障碍者较为常见，表现为食欲减退或消失、恶心、呕吐、腹胀，甚至中毒性肠麻痹，肠鸣音明显减弱，胃动力丧失，肠道扩张等［1］。目前其发病机制尚不十分清楚，可能与植物神经及肠神经系统的改变、Cajal间质细胞的丢失或减少、胃肠激素分泌异常、血液循环障碍、黏膜坏死脱落等因素有关[2-3]。乙酰胆碱和一氧化碳是胃肠道两种重要的神经递质，对胃肠运动和分泌等均具有十分重要的作用。本实验通过观察烫伤后大鼠结肠肌间神经丛胆碱能、CO能神经的变化，为进一步阐明烫伤肠功能障碍的病理机制提供基础资料。1材料和方法烫伤模型的建立健康SD大鼠40只，雌雄不拘，体重180～220g，随机分成烫伤组和对照组。两组大鼠禁食24h，烫伤组大鼠于背部剃毛，置剃毛区于100℃水中12s，造成背部30%TBSAⅢ度烫伤，伤后补液。对照组大鼠置于37℃水浴锅中12s模拟烫伤过程，其他处理同烫伤组。肠传输速率的测定建模后，烫伤组和对照组大鼠分别经口灌入印度墨汁mL，12h后，用1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，开胸经左心室灌注300mL生理盐水，快速冲洗血液后，立即用10%福尔马林500mL灌注固定1h，剖腹取出从幽门至直肠末端全部肠道，测量肠道全长及墨汁在肠道的推进距离，计算墨汁推进距离占肠道全长的百分比即肠传输速率。组织制备余下一批未经墨汁灌胃的烫伤组和对照组大鼠，同上述方法，剖腹分取结肠段，浸入上述固定液于4℃冰箱固定12h，然后按参考文献中所用方法沿肠系膜侧剪开肠管，把剪开的肠管平铺于干净的玻璃板上，在解剖显微镜下仔细将外纵肌层从环肌层和黏膜下层上剥离下来，制成外纵肌层标本。AE酶组织化学染色按Karnovsky-Root直接法进行，以碘化乙酰硫代胆碱为底物，四乙丙基焦磷酰胺为抑制物，以抑制其他胆碱酯酶的活性，只保留乙酰胆碱酯酶的活性。反应后用mol/LPBS充分漂洗，终止反应，续常规脱水、透明、封片、拍照。HO-2免疫组化染色每只大鼠再取5片外纵肌层标本，采用免疫组织化学SABC法。肠肌间神经节及神经元计数每只大鼠取2～3张铺片，在200倍光镜下，每个标本随机测量5个高倍镜视野内神经节和神经元的数目，取均值分别代表该标本神经节和神经元的密度。统计学处理方法采用t检验。2结果肠传输速率的变化烫伤组总长度为cm，传输长度为cm，传输速率为%，对照组总长度为cm，传输长度为%。烫伤组与对照组相比肠传输速率明显降低。结肠肌间神经丛AE组织化学观察光镜下，对照组大鼠结肠肌间神经丛中胆碱能神经成分呈棕黄色，由神经节和节间神经纤维束构成，胆碱能神经纤维呈“网络样”分布，胞体集中形成神经节，神经节较大，节间纤维束较粗，每个神经节约由8～12个神经元组成，大多数胆碱能神经元胞浆呈AE强阳性，胞核不着色；烫伤组大鼠结肠肌间神经丛中胆碱能神经节及节间纤维束较小，