睾丸扭转对大鼠生精能力的影响及维拉帕米的保护作用.docx

睾丸扭转对大鼠生精能力的影响及维拉帕米的保护作用【摘要】目的:探讨钙离子通道拮抗剂(维拉帕米,verapamil)对大鼠睾丸扭转复位后睾丸细胞损伤的保护作用。方法:选用出生1个月左右的健康雄性ＳＤ大鼠30只,随机平均分成3组，手术制作幼鼠睾丸扭转模型。对部分扭转组应用生理盐水或钙离子通道拮抗剂(维拉帕米)。术后6个月处死,取两侧睾丸标本，测定睾丸NO含量、NOS活性，并制备细胞悬液，检测记录每样本中单倍体细胞占细胞总数百分比。结果:B组单倍体细胞占细胞总数明显下降，而且睾丸组织NO含量、NOS活性升高，维拉帕米可减轻上述变化。结论:维拉帕米可以提高睾丸组织单倍体细胞的百分比，在一定程度上可以减轻睾丸组织损伤，对睾丸的生精能力有明显的保护作用。【关键词】睾丸扭转;维拉帕米;流式细胞术;一氧化氮【ABSTRACT】Objective:Toinvestigatetheprotectiveeffectofverapamilonthetestisaftertesticulartorsioninrats.Methods:30healthymaleSpragueDanleyrats(onemonthold)wererandomlydividedequallyintothreegroups.Amodeloftesticulartorsion(720degree,2hours)werecreated.NormalsalineorCa2+channalblocker(verapamil)wereadministratedintheinterventiongroups.Sixmonthslaters,nitricoxide(NO),nitricoxidesynthaseactivity(NOS)weremeasuredinbothtestisoftherats.AndtheDNAcontentweremeasuredbyflowcytometry,thepercentageofmonoploidwere:AftertorsionNOandNOSactivityincreasedgreatlyinbothside,andshowedobviouslymoreinthetorsiveside;ThepercentageofmonoploidsignificantlydecreasedintheBgroup(testiculartorsion),verapamilcouldreducetheextentofthesechanges.Conclusion:Theverapamilcouldraisethepercentageofmonoploidintestisandreducetheextentofdamages.【KEYWORDS】Testiculartorsion;Verapamil;Flowcytometry;Nitricoxide睾丸扭转是一种泌尿外科的急症,好发于青春期前后的儿童。动物实验及临床研究表明,急性睾丸扭转,即使没有睾丸组织的梗死出现,缺血后的睾丸血供恢复到正常水平,仍可出现睾丸生精功能的损害,生育能力的减低[1]。我们通过建立大鼠睾丸扭转模型,测定NO含量、NOS活性，用流式细胞技术检测睾丸内各种细胞的DNA含量,以此了解其生成精子的数量变化及钙离子通道拮抗剂(维拉帕米)对减轻睾丸细胞损伤的作用。1材料与方法动物模型建立与分组选用出生1个月左右SD雄性健康大鼠(体重180～200ｇ)30只，分为实验组和对照组，2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉。按下列要求实验A组(对照组)：8只大鼠，左侧阴囊切开,游离暴露睾丸,依扭转模型随意搬动,但不予扭转,阴囊缝合关闭。B组：11只大鼠，左侧阴囊切开,绕精索顺时针扭转睾丸720°,肉膜白膜缝合固定防止自发复位,阴囊缝合。2ｈ后,第二次切开左侧阴囊,将扭转的睾丸复位固定,缝合阴囊。C组：11只大鼠，方法同B组,复位前30min尾静脉缓慢注入维拉帕米注射液。标本处理睾丸匀浆的制备所有动物模型按组分笼饲养,术后6个月处死,采取两侧睾丸标本。经事先称量,各组动物身长、体重差异无显着性意义。剔净睾丸附着筋膜,冷生理盐水洗净血污后滤纸拭干、称重。用电子天平称取睾丸组织约,加入9倍冷生理盐水,用眼科剪剪碎后转入组织匀浆器中,睾丸匀浆4000r/min离心15min，取上清液严格按试剂盒说明书进行NO含量、NOS活性测定。睾丸单细胞悬液的制备用眼科剪把双侧睾丸一并剪碎，用BD公司生产的Medimachine及其配套产品制成单细胞悬液。用PBS分别洗涤三次标本，弃去上清液，用PBS调整细胞浓度到×106细胞/ml。①分别取100μl样本，加入CycleTestTMPlusDNA试剂盒A液250μl，轻轻摇匀不要震