淮山药多糖的免疫调节作用研究.docx

淮山药多糖的免疫调节作用研究【摘要】目的探讨淮山药粗多糖对小鼠的免疫调节作用。方法小鼠灌胃给予不同剂量的淮山药多糖，1次/d，连续8d，进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、测定血清溶血素测定、小鼠碳廓清实验。结果山药多糖具有增强小鼠淋巴细胞增殖能力的作用，促进小鼠抗体生成的作用和增强小鼠碳廓清能力的作用。结论淮山药多糖具有一定的免疫功能增强作用。【关键词】淮山药；多糖；免疫调节Abstract：ObjectiveToinvestigatetheimmunologicenhancementofDioscoreaoppositaoppositaindifferentdosages(200,400,800mg/kg)weregivenbyIGfor8seriesoftestswerecarriedout,suchasthespleenlymphcellstransformationofConAinducingmethod(MTTmethod),hemolytictestofbloodserumandhemchromeandmousecarbonresultsshowedthatDioscoreaoppositawassignificanttoConAinducedmiceLymphocytetransformationtest；HC50raisedinallthreeconcentrations;ratioofmonocyte-macrophagecarbongraineliminationhassignificantchangestotheoppositapossessesapotentialeffectofimmuneregulation.Keywords：DioscoreaoppositaThunb.;Polysaccharide;Immunitymoderation山药属常用中药，味甘、性平，具有补脾养胃、生津益肺、补肾涩精等作用。山药多糖Dioscoreaopposita是从山药中分离提纯的水溶性多糖成分，具有免疫调节作用。以往有关山药的药理研究多针对河南省出产的铁棍山药和太谷山药等怀山药品种。而山药在全国大部分地区均有栽培，淮山药为其在淮河中下游地区传统栽培品种。以食用为主，兼作药用。对淮山药等山药地方品种的药理作用至今仍缺乏研究。为了充分利用淮山药资源，本实验研究了江苏产淮山药粗多糖对小鼠的免疫调节作用。1材料样品淮山药DisoscoreaoppostitaThunb.来源：淮山药采自江苏省灌南县花苑乡。将淮山药削皮切片，晒干后粉碎，干燥后称取粗粉g，加入适量蒸馏水在水浴中浸提，其间不断搅拌，静置冷却后离心除去不溶物，收集上清液，减压浓缩。在冷却后的上清液中加入95%乙醇至醇含量在80%以上，不断搅拌，有大量沉淀生成，离心，收集沉淀，分别用无水甲醇和乙醚洗涤，以除去水分和杂质，得到灰白色粉末状粗多糖g(1g粉末相当于生药g)。粗多糖得率可以达到%，该粗多糖中含有%的山药多糖。动物和细胞ICR种小鼠18～22g，雄性，中国科学院上海克莱斯实验动物中心，合格证号：SCXK2003-2004。豚鼠，由江宁青龙动物养殖场提供，动物使用许可证号：2002-0057。所有实验动物均食用全价颗粒饲料，自由摄食饮水。YAC-1细胞，由南京中医药大学海洋中心药理毒理室提供。绵羊红细胞与补体制备健康绵羊颈脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中朝一个方向摇动，以脱纤维，用阿氏液保存于4℃冰箱保存备用。用时生理盐水2000r/min离心10min洗涤3遍。采集豚鼠血，分离出血清，前将1ml压积SRBC加入到5ml豚鼠血清中，放4℃冰箱30min，经常振荡，离心取上清，分装小瓶，-70℃保存。用时以生理盐水按1∶10稀释。2方法小鼠随机分为对照组及山药多糖200，400，800mg/kg［1］3个剂量组，每组10只。灌胃体积ml/10g体重，1次/d，连续8d。ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验1640培养液用微孔滤膜过滤除菌，加入10%小牛血清、1%谷氨酰胺、青霉素、链霉素及2-巯基乙醇，用无菌HC1或无菌NaOH调pH至～，制成完全培养液；用～的PBS缓冲液作溶剂，现用现配MTT溶液；以%的无菌NaHCO3将无菌Hansks液pH调至～；用双蒸水配制成100μg/ml的ConA液，过滤除菌后，-20℃保存；在96ml异丙醇中加入4mlHCl制成酸性异丙醇溶液。各组动物连续灌胃至第8天，每鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用摄子轻轻将脾撕碎，制成单个细胞悬液，200目过滤，用Hanks液多次洗涤、离心后悬浮于2ml完全培养液中，用台酚染色计活细胞，调整细胞浓度为2×106个/ml，分两孔放入培养孔中，每孔