正交试验法优化茵栀黄颗粒提取工艺.docx

正交试验法优化茵栀黄颗粒提取工艺【摘要】优化茵栀黄颗粒的提取工艺。［方法］以干膏得率和绿原酸提取率为考核指标，采用正交设计法对茵栀黄颗粒水提取工艺进行考察。［结果］茵栀黄颗粒最佳提取工艺的方案为A2B1C2，即加水量为8倍，提取2次，每次1h。［结论］优选的提取工艺科学合理，适于大规模生产。【关键词】茵栀黄颗粒高效液相色谱法正交试验提取工艺Abstract：［Objective］TooptimizeextractingprocessionofYinzhihuanggranules.［Methods］Theextractionprocessionwasstudiedbyorthogonaldesignwithdryextractyieldandtotalflavonoidsasthedetectivemarker.［Results］TheoptimumextractionconditionisA2B1C2,whichisadded8foldofwater,anddecoctedfor2times,1hourateverytime.［Conclusion］Theoptimizedwaterdecoctingconditionisreasonableandscientific,anditcouldbeusedinfuturelargescaledpreparationofYinzhihuanggranules.Keywords：Yinzhihuanggranules;HPLC;orthogonaldesign;extractiontechnical茵栀黄颗粒系由中药茵陈、栀子、黄芩经水提醇沉工艺而制成的颗粒剂，具有解热利尿、保肝降酶、退黄利胆的作用，用于治疗各种黄疸性肝炎。本实验采用正交设计方法，以干膏得率和绿原酸提取率为指标，对茵栀黄颗粒水提取工艺进行优化研究。1仪器与材料Waters600高效液相色谱仪，Waters600E四元泵，Waters2996PDA检测器，Empower工作站。绿原酸对照品购自中国药品生物制品检定所，批号分别为110753200212。药材购于义乌市医药有限公司，经鉴定符合《中国兽药典》2000版［1］规定。水为重蒸馏水，乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯。2方法与结果正交试验设计选用L9正交表，以干膏得率和绿原酸提取率为考核指标，考察水提取中的加水量、煎煮时间和煎煮次数3个因素，每个因素设3水平。其因素水平见表1。表1正交试验因素水平表样品提取液的制备按处方配比称取药材适量，按正交试验表进行水提取，药液经滤纸滤过，滤液浓缩至1∶，备用。干膏得率的测定精密量取上述提取液20ml，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥至恒重，计算出干浸膏得率，结果见表2。绿原酸含量的测定色谱条件色谱柱为SymmetryRC18柱；流动相为乙腈%磷酸水溶液；流速：1mL/min；进样量：20mL；柱温：30℃；柱效：理论板数不低于4000。在此条件下，绿原酸与其他组分能达到较好分离,峰纯度达到要求，见图1。图1绿原酸对照品与样品的高效液相色谱图对照品；2.样品对照品溶液的制备精密称取绿原酸度对照品4mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，即得。供试品溶液的制备精密吸取提取液1ml，置10ml量瓶中，加冰醋酸，加水稀释至刻度，摇匀，离心，用微孔滤膜滤过，取续滤液避光保存，作为供试品溶液。标准曲线的制备精密量取绿原酸对照品溶液、、、、置10ml量瓶中，加入冰醋酸，加水稀释至刻度，混匀，以微孔滤膜滤过。各取续滤液20μl分别注入液相色谱仪,测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品的进样量为横坐标作图,得到一条直，其回归方程：y=，说明绿原酸在～范围内，与峰面积之间呈良好的线性关系。图2绿原酸对照品的标准曲线精密度考察精密吸取对照品溶液20μL，连续进样5次，在上述色谱条件下测定绿原酸对照品的峰面积，平均峰面积为1609030；RSD=%。稳定性试验精密吸取供试品溶液20μl，分别于0、1、2、3、4和6h进样，测定供试品溶液中绿原酸的峰面积，RSD=%，说明样品溶液在6h内稳定。重现性试验精密量取同一批提取液5份，按供试品溶液的制备项下制备试液；进样20μl，测定峰面积，RSD为％，重现性良好。回收率试验精密量取已知含量的提取液6份，置10ml棕色量瓶中，分别加入绿原酸对照品，按供试品溶液的制备