三氯乙烯降解菌的分离鉴定及其降解特性.pdf

生态环境2008,17(5):1778-1783http://www.jeesci.comEcologyandEnvironmentE-mail:[e-mail]三氯乙烯降解菌的分离鉴定及其降解特性王新新1,2，张颖1*，韩斯琴1，王元芬1,2，李慧11.中国科学院沈阳应用生态研究所陆地生态过程重点实验室，辽宁沈阳110016；2.中国科学院研究生院，北京100049摘要：三氯乙烯是一种具有“三致”效应的有机氯代烃化合物，作为一种重要的化工原料在工业上广泛应用，同时也造成了大量的三氯乙烯进入自然环境，引起了严重的环境污染。为获得更为丰富的三氯乙烯降解微生物资源，利用水-硅油双相系统从实验室高浓度三氯乙烯胁迫底泥中，分离筛选得到两株三氯乙烯降解菌WF1、FT10。在三氯乙烯初始质量浓度为5mg·L-1的条件下，培养72h，菌WF1、FT10对三氯乙烯的降解率分别为53.36%、48.06%；在500mg·L-1乙酸钠作为共代谢基质的情况下，降解率分别为55.95%、55.62%，降解速率明显提高。根据形态学观察、16项生理生化实验和16SrRNA序列分析结果，将菌株WT1归为Achromobacterxylosoxidans，将菌株FT10归为Sporosarcinaaquimarina。对菌株培养条件进行优化，经SlideWrite统计软件拟合，菌株WT1和FT10在牛肉膏蛋白胨液体培养基上的最适生长温度分别为33.7℃和35.4℃，最适生长pH分别为7.6和7.9。关键词：三氯乙烯；降解菌；分离鉴定；底泥；无色杆菌；八叠球菌中图分类号：X172文献标识码：A文章编号：1672-2175（2008）05-1778-06三氯乙烯是一种易挥发的有机氯代烃化合物，Bio-Rad凝胶呈像系统、XSP-8CZ型显微镜、752型作为一种优良的溶剂广泛应用于多个行业。由于不紫外可见分光光度计、Agilent6890气相色谱仪。合理的废水排放和意外泄露，它被大量释放到环境1.2实验材料中，成为底泥水体中常见的污染物之一[1]。因其分主要试剂：三氯乙烯、硅油（聚甲基硅醇）、布广泛且具有致畸、致癌、致突变等潜在危险[2-3]，蛋白酶K、TaKaRaAgaroseGelDNAPurification试许多国家都已将其列入优先控制污染物黑名单[4]，剂盒、10×PCRReactionBuffer、10mMdNTP因此探索高效便捷的处理方式具有重要意义。利用Mixture、TaqDNA聚合酶。微生物降解三氯乙烯的方法具有去除率高、成本低无机盐培养基：KHPO1g·L-1，KHPO12424等优点，因而在三氯乙烯污染治理中备受关注[5-6]。g·L-1，NaCl0.5g·L-1，NHCl1g·L-1，MgSO·7HO0.2442目前国际上已经分离到了可以降解三氯乙烯的多g·L-1，CaCl15mg·L-1，FeSO·7HO2mg·L-1，242种微生物，主要有Pseudomonas、Methylocystis、CuSO·5HO0.4mg·L-1，KI1mg·L-1，MnSO·HO44242Xanthobacter、Methylosinus、Desulfuromonas、mg·L-1，HBO5mg·L-1，CoCl·6HO1mg·L-1，3322Alcaligenes、Ralstonia、Burkholderia、NaMoO·2HO2mg·L-1，NiCl·6HO2mg·L-1，pH24222Mycobacterium、Janibacter、Nitrosomonas等[7-10]，7.0±0.2。然而国内三氯乙烯污染治理相关的研究甚少，三氯牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5g·L-1，蛋白胨乙烯降解菌方面的研究更为罕见。本研究从实验室10g·L-1，NaCl5g·L-1，pH7.0±0.2。高浓度三氯乙烯污染底泥中，经富集驯化筛选得到1.3菌种富集、分离纯化两株三氯乙烯降解菌，通过菌种鉴定确定其分类地供试底泥采自辽河流域浑河沈阳段。采用250位，并探索了降解菌的最适培养条件，以期为修复mL培养瓶，分别加入200g底泥样品、50mL灭菌三氯乙烯污染提供理论依据。蒸馏水，模拟底泥自然环境。加入三氯乙烯，不断1实验材料与方法提高浓度至5000mg·L-1，120r·min-1摇床25℃恒1.1仪器温富集培养90d。在150mL三角瓶中分别加入80GNP-9080型恒温培养箱、GLC-3型超净工作mL无机盐培养基和20mL硅油[11]，添加三氯乙烯台、LDZX-40型自动高温灭菌锅、HZQ-C型气浴恒使其终浓度为500mg·L-1，加入2g上述经富集培温摇床、PTC-100TM型PCR仪、GENIE-2型旋涡混合养的底泥，150r·min-1摇床25℃