抗体酶专题知识专家讲座.pptx

内容抗体酶是生物催化剂对任何化学反应，反应物在变为产物之前，必须取得一定能量，成为活化态或称过渡态。过渡态处于最高能阶上。过渡态与反应物能阶之差称为活化能。取得活化能多少与反应速度成正比。过渡态理论认为，酶与底物结合经历了一个易于形成产物过渡态，实际上是降低了反应所需活化能。与反应过渡状态结合作用1969年Jencks依据抗体结合抗原高度特异性，与天然酶结合底物高度专一性相类似特征，在过渡态理论基础上首先提出构想：能与化学反应中过渡态结合抗体，可能含有酶活性，催化反应进行。1986年Lerner和Schultz证实了这一构想。抗体酶发觉1986年Schultz以对硝基苯酚磷酸胆碱酯（PNPPC）作为对应羧酸二酯过渡态类似物。诱导产生抗体酶使水解反应速度加紧1倍。抗体酶含有经典酶反应特征过渡态理论与抗体酶抗体酶特征抗体酶催化反应类型抗体酶特征抗体酶制备诱导法利用过渡态类似物制备抗体酶示意图诱导法抗体酶用于有机酯水解，过渡态类似物磷酸盐和磷酸酯作为免疫原诱导产生单克隆抗体催化水解反应比未催化反应快104倍。用一个带有电荷半抗原作为免疫原，在免疫进化过程中诱异抗体结合部位一个氨基酸残基带有互补电荷，使其含有酸、碱或亲核催化能力。拷贝法独特型抗独特型抗体抗独特型抗体酶引入法伴随噬菌体抗体库技术完善，可依据需要构建适当序列基因片断，绕过免疫学方法，构建全新抗体酶。噬菌体展示技术将组建亿万种不一样特异性抗体可变区基因库和抗体在大肠杆菌中功效性表示，与高效快速筛选伎俩结合起来，彻底改变了抗体酶生产传统路径。用工程抗体催化法生产抗体酶，不需要进行细胞融合以取得杂交瘤细胞，而且可筛选含有特定功效未知结构，含有生产简单、价格低、抗体免疫原性较低优点，并易取得稀有抗体。Fab片断由轻链和重链VH及CH1部分组成，作为一个催化剂，抗体酶有这么片断就行，无须完整抗体分子。从人或动物抗原中抽取基因，然后用PCR技术重新铸造轻链和重链，这么就能够把这些基因组合成100万个含有成对轻链和重链基因库。这些基因库是存放在细菌病毒里，经过随机地将基因和轻重链结合方法，就可大量制造Fab片断了。这就可在细菌培养中繁殖数百万计不一样抗体。抗体酶和酶一样也能够用化学修饰法加以改造。反抗体酶进行结构修饰关键是找到一个温和方法在抗体结合位置或附近引入含有催化功效基因。游离巯基就是适合基团之一，它含有高亲核性，易于氧化，能经过二硫化物进行交换反应或亲电反应而选择性修饰特点。抗体酶应用前景抗体酶用于肿瘤治疗静脉给药后，当药品扩散至肿瘤细胞表面或附近，抗体酶就会将前药快速水解释放出抗肿瘤药品，从而提升肿瘤细胞局部药品浓度，增强对肿瘤杀伤力，到达提升肿瘤化疗效果目标。当然前药只能被抗体酶水解而不能被内源性酶水解，抗原还要尽可能降低免疫原性。抗体酶研究，为人们提供了一条合理路径去设计适合于市场需要蛋白质，即人为地设计制作酶。它是酶工程一个全新领域。构建有别于天然功效酶新酶类，是酶工程研究又一前沿领地。