医院新冠核酸检测假阴性原因分析.pdf

****医院新冠核酸检测假阴性原因分析一、新冠结构二、新冠侵染原理三、新冠检测方法四、核酸检测假阴性原因1.取样留样2.保存运输3.检测环节4.核酸提取新冠(C0VID-19)是一种高传染性、有潜伏期的Virus,要诊断新冠是否感染最主要的方法是做新冠核酸检测。一、新冠结构新冠的遗传物质是单股正链RNAVirus,直径是60T40纳米，是一种3属的冠状Virus,其颗粒是圆形或者椭圆形，形态是多形性，表面是包膜，直径大概60-140纳米，一般感染人、鼠、猪、猫、犬等脊椎动物，能引起非典型的肺炎。新冠Virus的表面还存在很多的基础棘突，整个Virus看起来就像日冕一样，不同的冠状Virus长的不一样，Virus和以前的冠状Virus不一样，所以就命名为新冠Viruso新冠由五种成分构成：一个RNA基因链条和四种蛋白质。颗粒的最夕卜层是刺突糖蛋白(S,SpikeProtein),刺突下面由小包膜糖蛋白(E,EnvelopeProtein)和膜糖蛋白(M,MembraneProtein)构成的Virus包膜，包膜里面藏着的核心是一个由RNA基因链条和核衣壳蛋白(N,NucleocapsidProtein)构成的螺旋折叠结构。二、新冠侵染原理新冠Virus的核酸特点是可以以自身为模板，指导合成Virus相关蛋白质。Virus进入宿主细胞后，首先以VirusRNA为模板表达出RNA聚合酶，随后RNA聚合酶完成负链RNA的转录合成、各种结构蛋白mRNA的合成，以及Virus基因组RNA的复制。变异是Virus自我复制过程中的常态，Virus并不总能完全准确地复制出其遗传物质“副本”，其复制时常出现一些错误，从而导致基因突变。新冠所属的RNAVirus变异相对较快，大多数变异并不会使Virus“性情大变”，但也有一些变异带来值得关注的Virus性状改变，而这种对有利的变异发生的概率很低。三、新冠检测方法如果病人的体液中检测到新冠抗体、抗原或核酸三者中的任何一种，则意味着已被感染。目前广泛采用的是检测病原体的核酸序列，通过荧光RT-PCR检测法将一条RNA链逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA片段扩增，再通过荧光探测来标定扩增的DNA片段是否存在新冠核酸。四、新冠核酸检测结果假阴性原因整个核酸检测过程共分五步：取样、留样、保存运输、核酸提取、上机检测。任何一个环节出现问题，都会导致检测结果假阴性。假阴性原因：1.取样留样：根据国家卫建委的新冠检测标准可知，核酸检测标本主要有上呼吸道标本（咽拭子、鼻拭子等）、下呼吸道标本（痰液、肺泡灌洗液、支气管灌洗液等）和血液标本。由于新冠与普通流感Virus的明显区别在于，病人主要为干咳、无痰，所以目前的普遍采样方式为咽拭子。咽拭子的Virus含量少，再加上取样操作复杂，采样稍微不规范，就容易导致Virus载量过低而无法测出。2,保存运输：新冠标本保存、运输条件十分的严格，在4摄氏度时保存24小时以下，在-70摄氏度或以下，可以保存24小时以上。如果需要长途运输，则需要干冰制冷保藏。3检测环节：检测试剂灵敏度低、不按规范操作、或耗材被核酸酶污染。4,核酸提取：提取过程中Virus降解或Virus核酸提取收率低。另外，很多人关心的变异因素一般不会导致假阴性。目前，具备更强的传染性和致命性，世界卫生组织（WHO）正在密切关注的新冠变异Virus有十多种。虽然新冠Virus是RNA单链Virus,相较于DNAVirus会更加不稳定，具有较高的变异性。但是我国在检测过程中选用的是多个保守目标序列中的靶点，也就是说选取的是不容易发生变异的序列片段上的靶点，假阴性并非表明Virus一定发生了变异。****医院新冠核酸检测规范性分析一、核酸规范采样二、假阴性因素分析三、假阳性因素分析四、不合格样本影响结果新冠核酸检测是新冠肺炎确诊的金标准，但核酸阴性不等于没事，核酸阳性也可能是假阳性，所以不要过度神话核酸检测的结果，如何正确应用核酸检测结果，必须注意以下几点。一、核酸规范采样新冠样本采集-咽拭子规范操作新型冠状核酸混检样本采集规范操作二、假阴性因素分析有些确诊病例，核酸检测结果多次为阴性，主要原因归纳为：（1）入侵人体初期，人体内量尚未达到可检测的程度。采样时机和采样部位的不同，可能导致所采集的标本中没有足够量的；（2）任何检测试剂都有其检测下限（即敏感性），如果患者标本内的达不到所使用试剂的检测下限，则会出现假阴性；（3）实验室仪器设备性能和人员检测能力差、质量管理落实不到位等也会产生“假阴性”；（4）采样不规范、采集部位不当、采集标本不典型，导致标本中被感染的细胞太少或没有。即可能造成“假阴性”。可见规范采集的重要性。(5)靶基因的降解:一般情况下,DNA样本稳定性较好，在室温下放置8h仍不影响检