免疫组化在肿瘤病理诊断中的应用.pptx

免疫组化在肿瘤病理诊疗中应用免疫组织（或细胞）化学技术是免疫学与组织化学两种技术结合，它基本原理是应用抗原与抗体特异性结合，再用显色剂显色到达标识细胞某种抗原物质定性与定位检测技术，是一个方法简单，且有效肿瘤标识技术。当前在免疫组化技术围绕着提升敏感性与特异性不停改进和发展，但它仍有其不足——应用于蛋白水平，敏感性与特异性不足，故应与其它组织化学、电镜及分子生物学技术相结合。一、免疫组化在诊疗中应用标准1．预防假阳性与假阴性，预防操作中污染，规范操作，设阳性与阴性对照。2．选取2种以上同类抗体：当前肿瘤均为相关抗原，特异性不足，各种同类抗体可提升阳性率。3．正确评价免疫组化结果：其结果受抗体、特异性与质量、操作、标本固定等各种原因影响。4．合理选择抗体：既要符合设计要求，价廉物美，分1、2、3线抗体。5．待检标本抗原保留要好：要求快速、新鲜、充份固定，适当固定剂，福尔马林液固定标本要修复抗原。二、免疫组化在肿瘤诊疗中应用（一）上皮性肿瘤标识1．角蛋白（Keratin）：一个中间丝蛋白，分（1）表皮角蛋白（Epidermalkeratin，EK）——鳞状上皮或高分化鳞癌标识；（2）细胞角蛋白（cytokeratin，CK）——低分子角蛋白，对腺癌、移行细胞部及低分化鳞癌标识。普通用广谱型角蛋白抗体为好，惯用。2．上皮膜抗原（Epithelialmembraneantigen，EMA）：这亦是惯用上皮细胞标识抗体，细胞膜阳性，用Zanker’s、Bouin或B5固定液中固定为好。其在低分化和未分化上皮中表示好，但亦可在间变性大细胞淋巴瘤、恶性横纹肌样瘤中表示。3．桥粒蛋白（Desmoplakin）：主要标识上皮桥粒，DesmoⅡ仅表示于复层上皮。4．癌胚抗原（Carcinoembrgonicantigen，CEA）：是从结肠癌中分离而得一个球蛋白，定位于细胞膜上，对肠、胃、肺、胰、肝、乳腺等腺癌标识阳性，但个别非上皮肿瘤也可阳性。5．甲胎蛋白（AlphaFetoprotein，AFP）：由胎肝细胞提取一个酸性糖蛋白，细胞浆和膜上表示，它对肝细胞癌、卵黄囊癌特异性标识。睾丸（二）间叶源性肿瘤免疫组化标识间叶组织包含纤维结缔组织、脂肪、肌肉、血管、骨、软骨及外周神经等，间叶组织肿瘤往往由多向分化原始间叶细胞产生，存在共性，标识抗体特异性不足，有交叉反应。1．波纹蛋白（Vimentin，Vim）：是一个细胞中间丝蛋白抗体，在多数软组织肿瘤均可表示，但纤维细胞较显著，在一些上皮性肿瘤也有阳性反应。惯用作间叶源与上皮源肿瘤第一线判别抗体2．结蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、横纹肌均可阳性。3．肌动蛋白（Actin）：平滑肌、血管内皮、肌上皮细胞标识，HHF35特异。4．肌球蛋白（Myotlobin），肌红蛋白（myosin）：对横纹肌标识很好。5．第因子Ⅷ，CD34：对血管内皮细胞肿瘤标识较特异。6．S-100蛋白：是一个周围神经雪旺氏细胞特异标识抗体，后发觉对脂细胞、朗格罕氏细胞、肌上皮细胞、黑色素细胞及其肿瘤均可阳性。7．酸性或碱性磷酸酶：对骨与软骨肿瘤标识好。（三）双向分化肿瘤标识即有上皮与间叶两种细胞分化肿瘤标识，如滑膜肉瘤、间皮肉瘤、脑膜瘤、癌肉瘤、上皮样肉瘤等，普通采取CK、EMA标识上皮，Vim等标识间叶细胞。另外有一个恶性纤维组织细胞瘤，由纤维细胞、肌纤维母细胞和组织细胞混合组成恶性肿瘤，故应用Vim和组织细胞标识来诊疗。（四）神经细胞、胶质细胞及神经内分泌肿瘤标识1．神经原特异性烯醇化酶（NeuronSpecificEnolase，NSE）：神经原肿瘤标识。2．胶质纤维酸性蛋白（GlialFibrillalyAcidicprotein，GFAP）：脑胶质细胞特异性标识抗体。CD34+F8血管3．神经内分泌肿瘤标识：包含类癌、胰岛、垂体瘤、甲状腺髓样癌、皮肤Merkel细胞癌、原始神经外胚层瘤（PNET）等，当前应用NSE、嗜铬蛋白颗粒A（CgA）及触突素（Syn）三种抗体同时或两种一起用，因NSE不够特异。（五）淋巴网状组织肿瘤（淋巴瘤）标识1．B细胞标识抗体：CD20（L26），Ig重链（IgG、M、A、E）、轻链（λ、κ）、CD79a。2．T细胞标识抗体：CD45RO（UCHL-1），CD3很好。CD563．组织细胞标识抗体：Mac387、CD14、抗溶菌酶（lysozyme）、抗糜蛋白酶（α-1Antichymotrypsin）等。4．霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’slymphoma，HL）R-S细胞（Reed-Sternbergcell）标识抗体：CD15、CD305．白细胞共同抗原（leucocytecommonAntigen，LCA）：它对淋巴网状细胞均为膜阳性，作第一线抗体为好。注：（1）国际上将百余种