香港牡蛎钙调蛋白基因的克隆和组织.pdf

安徽农业科学，Ｊ．ＡｎｈＡｇｒｉｃｕｉ２．Ｓ０２２，５０ｃｉ（２４．）７：－５８１香港牡蛎钙调蛋白基因的克隆和组织表达分析李素萍，喻达辉，李应清，王培，郭颖，白丽蓉∗（北部湾大学海洋学院，广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室，广西钦州５３５０１１）摘要［目的］探究ＣａＭ在香港牡蛎（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａｈｏｎｇｋｏｎｇｅｎｓｉｓ）壳钙代谢中的作用及分子机制。［方法］以香港牡蛎为试验材料，利用ＲＡＣＥ－ＰＣＲ技术克隆获得了香港牡蛎钙调蛋白（ＣａＭ）基因ｃＤＮＡ序列，并进行生物信息学分析和ｑＲＴ－ＰＣＲ试验。［结果］香港牡蛎ＣａＭ基因的ｃＤＮＡ序列全长为７７ｂｐ０，开放阅读框为４５０ｂｐ，５端非编码区′５４ｂｐ，３非编码区′２６６ｂｐ，共编码１４９个氨基酸；预测ＣａＭ蛋白分子量为１６．８２ｋＤ，理论等电点为４．，１亲水４性（ＧＲＡＶＹ）总平均值为－０．６，不稳定指数５６为３１．，属于稳定０８性亲水蛋白。氨基酸序列同源性分析和基因系统进化树结果显示，香港牡蛎与长牡蛎的ＣａＭ相似性最高，亲缘关系最近，其系统进化分析与传统的形态学分类相吻合。实时荧光定量ＰＣＲ结果显示，ＣａＭ基因在香港牡蛎的各个组织中均有表达，其中在鳃中的表达量最高（Ｐ＜０．），０５外套膜次之，鳃是参与牡蛎钙代谢中钙吸收的关键器官，外套膜是分泌有机质的关键器官。［结论］推测该基因在香港牡蛎壳形成过程中调节钙的摄取、运输和分泌方面发挥重要作用。关键词香港牡蛎；钙调蛋白；基因克隆；组织表达分析中图分类号Ｓ９１７．４文献标识码Ａ文章编号０５１－６６７（１１２０）２２２４－００－７０５７ｄｏｉ：１０．３ｊ．９６９／ｉｓｓｎ－６６．１１０５１．２７０２２．２４．０１９开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩ）Ｄ：ＭｏｌｅｃＣｕｌｌｏｎｉｎｇａｒａｎＥｄｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｏｆｓｉｓＣａｌｍｏｄｕｌＧｅｎｅｉｎＣｒａｓｓｏｓｔｒｅａｈｏｎｇｋｏｎｇｅｎｓｉｓＬＩＳｕ⁃ｐ，ｉｎｇＹＵＤａ⁃，ｈＬＩｕｉＹｉｎｇ⁃ｅｔｑｉｎｇａｌ（ＧｕａｎｇＫｅｘＬｙｉａｂｏｒａｔｏｒｏｆＢｅｉＧｕｌｆｂｕｙＭａｒｉｎｅＢｉｏｄｉｖＣｏｎｓｅｒｅｒｓｉｔｙＣｏｖａｔｉｏｎ，ｌｌｏｅｇｅｆＯｃｅａ⁃ｎｏｇｒａＢｐｅｉｈｙＧｕｌｆｂｕ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔＱｉｎｚｈｏＧｕｙ，ｕａｎｇ，５３５０１１）ｘｉＡｂｓｔｒａｃｔ［Ｏｂｊｅｃｔｉｉｎｖｖｅ］ＴｏｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｏａｎｌｅｍｄｏｌｅｃｍｕｌｅｃｈａｎｉｓａｒｏｆＣａＭｍｉｎｃａｌｃｉｍｅｔａｕｍｂｏｏｆｌＣｒａｓｓｏｓｔｒｅａｉｓｍｈｏｎｇｋｏｎｇｅｎｓｉｓｓｈｅｌｌｓ．［ＭｅｔｈｏｃＤＮＡｄ］Ｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｃａｌｍｏ（ｄｕｌＣａＭ）ｉｎｇｅｎｅｏｆＣｒａｓｓｏｓｔｒｅａｈｏｎｇｋｏｎｇｅｎｓｉｓｗａｓｃｌｏｎｅｂｙＲＡＣＥｄ⁃ＰＣＲａｎａｎａｄｌｙｚｂｙｂｅｉｏｉｎｄｆｏｒ⁃ｍａｔｉｃｓａｎｑＲＴｄ⁃ＰＣＲ［Ｒｅｓ．ｕｌｒｅｓｔ］ＴｈｅｓｈｏｕｌｔｓｗｔｈａｔｅｄｔｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｏｆＣａＭｇｅｎｅｗａｓ７７ｂｐ０ｏ，ｐｅｎｒｅａｄｆｉｎｇｒａｗｍａｓｅ４５０ｂｐ５，′ｅｎｎｏｎｄ⁃ｃｏｄｒｅｇｉｏｎｉｎｇｗａｓ５４ｂｐ３，′ｎｏｎ⁃ｃｏｒｅｇｉｏｎｄｉｎｇｗａｓ２６６ｂｐｅｎｃｏ，１ｄ４９ｉｎｇａｍｉｎｏａｃｉＴｈｅｄｓｐ．ｒｅｄｉｃｔｅｍｏｌｅｃｄｗｕｌｅｉｇｈｔａｒｏｆＣａＭｐｒｏｔｅｉｎｗａｓ１６．８２ｋＤ，ａｎｔｈｅｄｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｉｓｏｅｌｐｅｃｔｒｉｃｏｉｎｔｌｗａｓ４．１Ｔｈｅ４．ｍｅａｎｖａｌｕｏｆｔｏｔａｅｒａｔｉｎｇｌｏｆｈｙｄｒｏｐ（ｈｉＧＲＡｌｉｃｉｔＶＹｗａｓ）－ｙ０．６５ａｎ６ｔｈｅ，ｄｉｎ⁃ｓｔａｂｉｎｉｌｄｉｔｗｅａｓｘ３１ｙ．０ｗ８ｈｉｃｈ，ｗａｓａｓｔａｈｂｌｙｄｅｒｏｐｐｒｏｔｅｉｎｈｉｌＴｈｅｉｃｈｏ．ｍｏｌａｎａｏｇｙｌｙｏｆａｓｉｓｍｉｎｏａｃｉｓｅｑｄｕｅｎｃｅｓａｎｐｄｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｅｄｔｈｅＣａＭｓｉｍｉｌｂａｒｉｔｅｔｗＣｒａｓｓｏｓｔｒｅａｅｅｎｙｈｏｎｇｋｏｎｇｅｎｓｉｓａｎＣｒａｓｓｏｓｔｒｅａｄｇｉｇａｓｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ，ａｎｔｈｅｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｗａｓｓｉｓｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｍｏｒｐｈｏｌｃｌｌｏｇｉｃａａｓｓｉＲｅａｆｌｉｃａｔｉｏｎｌ⁃ｑｔｉｕａｎｔｉｔａｔｉｍｅ．ＰＣＲｒｅｓｖｓｈｏｕｌｅｔｓｗｔｈａｔｅｄＣａＭｇｅｎｅｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｉｎａｌｌｔｉｓｄ⁃ｓｕｅｓｏｆＣｒａｓｓｏｓｔｒｅａｈｏｎｇｋｏｎｇｅｎｓｉｓ，ｗｉｔｈｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｉｎｅｇｉｌｌｌ（Ｐ＜ｓ０．０５），ｆｏｌｌｂｙｏｔｈｅｗｅｍｄ