BCA蛋白浓度测定试剂盒.docx

BCA蛋白浓度测定试剂盒说明23225蛋白质化验试剂盒：为5试管或50微孔板的检测提供充足的试剂23227蛋白质化验试剂盒：为250试管或25微孔板的检测提供充足的试剂试剂盒组分：BCA试剂A，10mL（No.23225产品中）或5mL（No.23227产品中），碳酸钠，碳酸氢钠，二喹琳甲酸，酒石酸钠溶于0・1M氢氧化钠中。BCA试剂B,25mL包括4%硫酸铜一次性标准白蛋白，2mg/mL,10伪mL安瓿，包含2mg/mL牛血清白蛋白（BSA）存在于0.9%盐和0.05%叠氮化钠中。储存：以上试剂保持在室温下储存和装运注意：如果试剂A或试剂B在低温下运输或长期储存时出现沉淀现象，可以通过缓慢加温或轻轻搅拌溶液使沉淀物溶解。当试剂变色或确定微生物污染时请丢球试剂盒。目录介绍1准备标准试剂和工作试剂准备试..33管准备微型版故障检TOC\o"1-5"\h\z修4有关美国热电其他产品5附加信息5参考文献6介绍美国热电（Thermo）公司的BCA蛋白浓度测定试剂盒是基于二喹琳甲酸（BCA）通过比色检测和定量测定总蛋白的洗涤剂兼容配方。该方法通过碱性介质中的一种蛋白结合了Cu2使其显著减少转变为Cu1（缩二脲反应）。用一种含二奎琳甲酸的试剂选择性的比色法高敏感的比色杯中的Cu1.这种测定方法的紫色色反应产物是通过BCA的两个分子和亚铜离子螯合作用形成的。这种水溶性复合物在562nm处有强吸收峰。在大的活性范围内（20-20gMmL）几乎同蛋白浓度增加呈线性关系。BCA法不是真正的终点的方法；也就是说，最终颜色继续发展。孵化之后，继续的颜色发展速度是足够慢以允许一起进行测定大量样本。大分子结构的蛋白质，肽键的数量和存在的四个特定氨基酸（半胱氨酸,胱氨酸，色氨酸和酪氨酸）据说是与BCA形成颜色产物的原因。因此，蛋白浓度的测量通常要参照标准的一个常见的蛋白质如牛血清白蛋白。一系列已知浓度的蛋白质稀释液是为与之相近的未知蛋白质浓度测定准备的。因为每一个未知浓度的测定都需要基于标准曲线。如果需要将一个未知蛋白精确定量，选择一个与未知蛋白特性相似的标准蛋白是可取的。例如，当测定免疫球蛋白时牛血清丙种球蛋白可以被当做标准蛋白。以下给出了两种检测过程：其中，试管程序需要一个较大的体积（0・1毫升）的蛋白质样品。然而，因为它使用了一个样品比例为1:20的工作试剂（v/V,所以将干扰物质的影响降到最小。在酶处理程序提供了一样品处理酶，需要体积较小（10-25讪的蛋白质样品。然而，由于使用了样品比例为1:8的工作试剂（V/V,所以在克服干扰物质浓度时灵活性降低，从而获得的检测水平较低。标准试剂和工作试剂的准备（试验程序需要的两个）A.准备稀释的BSA标准液表1为导向，准备一套蛋白质标准。稀释标准的内容为，将一个盛在安瓿管中的标准BSA稀释到几个洁净的瓶子中，最好使用和样本（S）相同量的稀释剂。根据表1的建议：每1毫升的安瓿管中加入2毫克/毫升的BSA标准液对于准备一系列的标准稀释液是足够的。每个稀释标准重复三次也是足够量的。表一：准备稀释的BSA标准液标准试管协议和微型版程序的稀释方案（活性范围=20-20冯/mL）Mg.HJ算HE体耿iML)BSA来址休削（UL>USA吃浓也luUnnL}A0汕0的纵液二TIMOc325325的飙液loooD-E5F1325的E许种液25(1G325H1的<；骨幡秤裁251ICO04空JwfatTv(Ml)BSA巴说duUmL>—A(X>1的MUt251)4WO门DCF\25C150血的B行K样液D14的云E11的D悴幡PF浪5F10.O空fl加强试管协议的稀释方案（活性范围=5-250血/mL）B:准备BCA的工作试剂（WR）1总共需要的WR的体积可以通过以下公式计算出来：（标准液+未知液）X（平行数目）X（每个样品中加入的WR体积）=总共所需的WR体积例如：标准的试管程序有三个未知液，每个样品做两组重复：（标准液9mL+未知液3mL）X（平行数目2）X（2mL）二总共所需的WR体积48mL注意：试管程序中每个样品管加2.0mlWR微型版程序中每个样品中只需要加2ulWR2、WR的制备：（BCA试剂A:B=50:1），对上述样品，将50mL试剂A与1mL试剂B混合。注意：当试剂B加入到试剂A的开