抗核抗体检测质量要求与结果合理判读.pptx

抗核抗体检测的质量要求及结果自身免疫性疾病自身免疫病(Autoimmunediseases,AID)自身免疫病的系统受累自身免疫病的“病谱”自身免疫病共同特征自身免疫病主要实验检查自身抗体与临床疾病的关系自身抗体的特性常检测的自身抗体抗核抗体（ANA）抗核抗体（ANA）抗DNA抗体（anti-dsDNA，anti-ssDNA）抗组蛋白抗体（histones:H1,H2A,H2B,H3,H4,H2A-H2B）抗ENA（抗:Sm,nRNP,SSA/Ro,SSB/La,rRNP,Scl-70,Jo-1,PCNA,.…）1.常规临床诊断ANA种类:数十种如何根据患者病情挑选具有诊断价值的最佳自身抗体组合?如何选择合理的检测方法，并对结果作出正确的判断?将为患者得到及时准确的诊断和治疗发挥至关重要的免疫检验工作者的目的:保证检测结果的可靠性和准确性敏感性（sensitivity）特异性（specificity）敏感性和特异性并不能告诉医生阳性结阳性预测值（PPV）阴性预测值（NPV）ANA检测的选择原则ANA检测的选择原则ANA免疫学测定方法IFA－ANAIFA－筛查ANA有效的“金标准”1)Mariz.ArthRheumatol,2011,63:191抗核膜抗体(抗板层素抗体)粗颗粒型抗RNP/Sm抗体荧光模式:§Hep-2细胞:间期时,整个细胞核呈现粗颗粒,但有时也出现中等到细的颗粒荧光,核仁为阴性;在分裂期细胞中,浓缩的染色体部位为阴性,而外周区几乎为均质型、光滑的荧光.§灵长类肝组织切片:细胞核亦呈现颗粒型荧光,核仁为阴性,荧光强度与Hep-2细胞相同.细颗粒型抗SS-A/SS-B抗体荧光模式:§Hep-2细胞:间期细胞核呈现细颗粒型荧光,核仁有部分不发荧光。分裂期细胞在染色体以外显示颗粒荧光,而染色体本身则不发荧光.§灵长类肝组织切片:肝细胞核及部分核仁可见细颗粒荧光,细胞浆不发荧光.§在某些细胞（如淋巴细胞、巨噬细胞）中的荧光ANA常见核型与疾病关系ANA临床诊断CTD特性ArthRheumat,2002,47,pp434–444IFA法检测ANA时应注意的问题IFA法检测ANA时应注意的问题IFA法检测ANA时应注意的问题ANA室间结果很难具备可比性15个国际Lab同时用HEp-2-IFA进行ANA的检测，所获得的平均变异系数（CV）值如下：部分自身抗体的国际参考品抗ds-DNA检测单链DNA,变性的DNA(嘌呤和嘧啶碱基)双链DNA,天然DNA(氧核糖核酸骨架)相关疾病:风湿病:ssDNA:SLE:80.8%;Sjögren‘s综合征:40.0%;硬皮病:44.0%;RA:12.3%(欧蒙)健康献血员:6.8%(欧蒙)风湿病:dsDNA:SLE:30%-90%;欧蒙(51.7%)抗dsDNA抗体ANA(均质型)组蛋白抗体：抗原:组蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4(主要的靶抗原为H1和H2B);功能:核小体的形成相关疾病:药物诱导性LE:100%(抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗体);SLE:40%-80%、欧蒙(56.4%);在其他风湿病中很少见抗核小体抗体:抗原:组蛋白和DNA形成的复合物;功能:染色体的功能使用注意事项使用注意事项抗可提取性核抗原（ENA）抗体谱的检测抗ENA抗体检测方法DID和CIEP酶联免疫吸附试验(ELISA)免疫印迹技术（IB）免疫斑点技术（IB）Jo-1Centro迄今为止还没有一种检测抗ENA既高特异又高敏感的方法。欧洲ConsensusWorkshops曾推荐采用两种或两种以上的方法检测抗ENA抗体，由于费用昂贵，目前难以广泛采纳。某些实验室采用ELISA-CIEP联合应用检测技术来解决ELISA低亲和力的问题，例如，先用简便快速的ELISA筛查抗ENA抗体，阳性标本再用CIEP予以确认，但常规实验室也难以接受ELISAANA检测推荐导则临床可疑病例