正交试验优选荔枝草中总黄酮的提取工艺.docx

正交试验优选荔枝草中总黄酮的提取工艺摘要目的：优化荔枝中总黄酮的提取工艺。方法：采用芦丁为对照品，利用紫外分光光度法检测荔枝草中总黄酮的含量。在单因素试验考察溶剂的基础上，采用L9（34）正交试验法选择荔枝草中总黄酮的提取工艺，并以溶剂浓度、提取温度、溶剂用量和提取时间为考察因素。结果：最佳提取工艺为：添加20倍量的70%C2H5OH，80℃提取120分钟，总黄酮提取率为6.86%。结论：优化的提取工艺简便、准确、重现性好，可用于工业生产荔枝草总黄酮提取。关键词荔枝草；正交试验；总黄酮；提取工艺荔枝草是唇形科鼠尾草属植物荔枝草SalviaplebeiaR.Br.的全草，其主要成分有黄酮、酚类、木质素、甾醇和挥发油等成分[1]。荔枝草性凉，具有清热解毒，凉血利尿，消除水肿的作用。可以治疗乳腺炎、痔疮肿痛、出血、跌打损伤，痈疮湿疹[2]；临床用于治疗急性扁桃体炎、阴道炎、宫颈糜烂等[3]。本文主要通过单因素试验和正交试验，对荔枝草叶总黄酮的提取工艺进行了优化。1材料仪器1.2试药荔枝草药品来自广西大明山，芦丁（中国食品药品检定研究院），试剂均为分析纯。2方法和结果2.1总黄酮含量测定[5]2.1.1对照品芦丁溶液的制备精密称取芦丁的标准品10.9mg，将标准品放入50mL容量瓶中，再在容量瓶中滴加70%C2H5OH，超声将标准品溶解，再用C2H5OH定容至刻度线，即得0.218mg/mL的芦丁标准品溶液。2.1.2供试品溶液的制备称取荔枝草全草2g，将荔枝草全草撕碎放入500mL圆底烧瓶中，再在容量瓶中加入70%C2H5OH20mL，将容量瓶置于水浴锅上连续回流提取2次，每次1.5h，趁热滤过，合并滤液稀释后，倒入100mL容量瓶中，用C2H5OH定容至刻度线，即得样品待测液。2.1.3最大吸收波长的选择将荔枝草提取液、对照品溶液和70%C2H5OH溶液分别精密吸取一定量并分别放置于三个25mL量瓶中，先在其中各加入1.0mL的5％NaNO2，上下颠倒几次，摇晃均匀后静置6min，再在其中滴加入1.0mL10％的Al(NO3)3，摇匀后放置6min，再加入10.0mL4%的NaOH，再用70%C2H5OH溶液至容量瓶刻度线，摇匀后放置15min。最后按照紫外可分光光度法对波长进行试验，在400～700nm处，波长范围内扫描。结果，荔枝草提取液在500nm波长处存在最大吸收，芦丁溶液502nm处存在最大吸收峰，空白对照品在此处不存在吸收峰，所以确定最大吸收波长是500nm（图A、B、C）。2.1.4标准曲线的制作分别精密吸取1、2、4、6、8mL的芦丁对照品溶液，将其滴加入三个25mL容量瓶中，先在各容量瓶滴加入1.0mL5％的NaNO2，上下颠倒几次，摇晃均匀后静置6min，再在其中滴加入1.0mL10％的Al(NO3)3，摇匀后放置6min，再加入10.0mL4%的NaOH，再用70%C2H5OH溶液至容量瓶刻度线，摇匀后放置15min。并采用相应的试剂为空白，可以在500nm波长处检测吸光度（A）。以吸光度（A）为纵坐标，用质量浓度（c）为横坐标，绘制标准曲线，就可以得到回归方程为A=0.0111c+0.0085(R=0.9991，n=5）。结果表明，芦丁质量浓度在8.72~69.76μg·mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系。见表1-1，图1-1。2.1.5精密度试验精密吸取芦丁对照品溶液5份，按2.1.3项显色，连续测定5次其吸光度，并记录，RSD=0.4％（<2%），结果见表1-2