蛋白质含量测定法.ppt

蛋白质含量测定法考马斯亮兰法（Bradford法）器材与试剂实验方法微量法取10支试管，分别编号后按表1-3剂量依次加入稀释的标准蛋白（或未知蛋白）、去离子水和考马斯亮兰染料。其他步骤同上，不过使用753分光光度计（狭缝4）。SDS干扰实验取5支试管，分别编号后按表1-5剂量依次加入标准蛋白、SDS、去离子水和考马斯亮兰染料。每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。加完染料20min后，使用753分光光度计（狭缝4），塑料比色皿，在595nm处测量吸光度A595。实验数据与结果分析微量法的数据和图SDS干扰数据和图图3考马斯亮兰SDS干扰实验由上图可以看出，十二烷基硫酸钠(SDS)对考马斯亮兰法测蛋白质含量有干扰，同是0.103mg/ml的标准蛋白与3.0ml考马斯亮兰，但随着SDS浓度的增加，其混合液的595nm处的吸收峰逐渐降低，而后有一小段回升，最后趋于渐近线。紫外吸收法[器材与试剂][实验数据与结果分析]根据表4，以A280为纵坐标，SBA浓度为横坐标，作图4。根据直线拟和方程y=0.6105x+0.0132求解当标准蛋白（牛血清清蛋白）与文献值6.3比较接近。紫外215nm与225nm的吸收差法的数据和图表5紫外215nm与225nm的吸收差法管号123456未知BSA(1.03mg/ml)体积00.10.20.30.40.5H2O5.04.94.84.74.64.5BSA浓度(μg/ml)020.641.261.882.4103A21500.2870.4590.7941.0901.4010.574A22500.1650.2640.4390.6210.8030.286吸收差△00.1220.1950.3550.4690.5980.288根据表5，以吸收差△为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，作图5。图5215nm与225nm吸收差法肽键测定法图6肽键测定法