植物愈伤组织的诱导[金线兰愈伤组织诱导的最佳激素配比].docx

第PAGE\*Arabic\*MERGEFORMAT10页共NUMPAGES\*MERGEFORMAT10页植物愈伤组织的诱导[金线兰愈伤组织诱导的最佳激素配比]摘要。以金线兰根状茎、幼茎、叶片、离体胚为外植体，４种激素２，４－Ｄ、ＮＡＡ、６－ＢＡ、ＺＴ采用Ｌ９（３４）正交表处理，对愈伤组织诱导的条件进行研究。结果表明，６－ＢＡ和２，４－Ｄ在诱导金线兰愈伤组织中作用极为显著，４种激素对愈伤组织的诱导作用大小依次为，６－ＢＡ＞２，４－Ｄ＞ＮＡＡ＞ＺＴ，初步断定金线兰愈伤组织诱导的最佳激素配比是０.２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０.９ｍｇ／ＬＮＡＡ＋１.０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０.５０ｍｇ／ＬＺＴ；根状茎和幼茎作为外植体更易诱导愈伤组织形成；暗培养较光暗交替更易诱导愈伤组织生长。关键词：金线兰；愈伤组织；诱导；条件中图分类号：Ｓ６８２.３１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）12－2568-03studyontheoptimumhormoneratioinducingcallusofanoectochilusroxburghiiＬＩＮＨａｉ，ＨＡＯＨｕｉ－ｍｉｎ（ＲｕｒａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＨｅｂｉＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｏｃａｔｉｏｎａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｇｙ，Ｈｅｂｉ４５８０３０，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇｔｈｅｒｈｉｚｏｍｅ，ｌｅａｆｂｌａｄｅ，ｓｔｅａｍａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｅｍｂｒｙｏｏｆＡｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉａｓｅｘｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅｉｎｄｕｃｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｃａｌｌｕｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙＬ９（３４）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎｏｆｆｏｕｒｋｉｎｄｓｏｆｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ，２，４－Ｄ，６－ＢＡ，ＮＡＡａｎｄＺＴ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ６－ＢＡａｎｄ２，４－Ｄｐｌａｙｅｄｅｘｔｒｅｍｅｌｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｓｉｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｃａｌｌｕｓ.Ｔｈｅｏｒｄｅｒｏｆｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｔｈｅｆｏｕｒｒｅｇｕｌａｔｏｒｓｗａｓ６－ＢＡ＞２，４－Ｄ＞ＮＡＡ＞ＺＴ.ＴｈｅｂｅｓｔｍｅｄｉｕｍｆｏｒｃａｌｌｉｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔｗａｓＭＳ＋０.２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０.９ｍｇ／ＬＮＡＡ＋１.０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０.５０ｍｇ／ＬＺＴ.Ｉｎｄｕｃｉｎｇｃａｌｌｕｓｆｒｏｍｒｈｉｚｏｍｅａｎｄｓｔｅｍｗａｓｅａｓｉｅｒ；ａｎｄｃａｌｌｕｓｂｒｏｗｎｉｎｇｒａｔｅｕｎｄｅｒｄａｒｋｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｕｎｄｅｒｌｉｇｈｔ－ｄａｒｋａｌｔｅｒｎａｔｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ；ｃａｌｌｕｓ；inducement；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ金线兰［Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ（Ｗａｌｌ.）Ｌｉｎｄｌ.］，兰科开唇兰属植物，全草入药，味甘、性平，具有清热凉血、除湿解毒的功效，可治疗肺结核、糖尿病、肾炎、膀胱炎、重症肌无力、遗精、风湿性及类风湿性关节炎、小儿惊风、妇女白带以及毒蛇咬伤等症，是民间珍稀名贵的中草药［１］。除药用外，由于株型矮小，叶型优美，叶面黑紫色，有金黄色带有绢丝光泽的美丽网脉，是观赏价值极高的室内观叶珍品，具有广阔的开发利用前景。金线兰种子自然条件下萌发率很低，再加上过度采集，野生资源日益枯竭［２］。在人工培养条件下诱导愈伤组织生长并使其增殖是实现快繁和分离其次生代谢产物获取金线兰药用成分的重要途径，但目前罕见金线兰愈伤组织诱导的研究报道。采用正交试验研究了４种激素对诱导愈伤组织生长的影响，为金线兰愈伤组织诱导和细胞培养体系的建立提供依据。１材料与方法１.１材料外植体。于花卉市场采购金线兰植株。金线兰离体胚。于市场采购金线兰种子，清水浸泡２４ｈ，剥取离体胚。１.２方法１.２.１培养基及外植体的消毒与接种培养基：ＭＳ基本培养基＋３0.０g/l蔗糖＋８.0g/l琼脂，附加不同浓度的２，４－Ｄ、ＮＡＡ、６－ＢＡ、ＺＴ，ｐＨ值为５.８～６.０，每１５０ｍＬ三角瓶中加培养基３０～４０ｍＬ，灭菌２０ｍｉｎ，双层牛皮纸封口，灭菌后１～２ｄ备用。外植体消毒：在超洁净工作台上进行操作，将金线兰芽的尖端部分、幼嫩的根状茎、新生叶片用清水冲洗干净后，再用去离子水冲洗５次，用体积分数为７５％的酒精浸泡３０ｓ后再用无菌水冲洗３次，０.１g/10