植物组织中淀粉含量的测定_1.docx

第PAGE\*Arabic\*MERGEFORMAT8页共NUMPAGES\*MERGEFORMAT8页植物组织中淀粉含量的测定Ⅰ蒽酮硫酸法一、原理淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物材料。（二）试剂o浓硫酸（比重1.84）。o9.2mol/lhclo4。o蒽酮试剂，同实验24。（三）仪器设备电子天平，容量瓶。100ml4个、50ml2个，漏斗，小试管若干支，电炉，刻度吸管0.5ml1支、2.0ml3支、5ml4支，分光光度计，记号笔。三、实验步骤1.标准曲线制作同实验24恩酮法。2.样品提取称取50～100mg粉碎过100目筛的烘干样品，置于15ml刻度试管中，加入6～7ml80％乙醇，在80℃水浴中提取30min，取出离心（3000rpm）5min，收集上清液。重复提取两次（各10min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于85℃恒温水浴，使乙醇蒸发至2～3ml，转移至50ml容量瓶，以蒸馏水定容，供可溶性糖的测定。向沉淀中加蒸馏水3ml，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化15min。冷却后，加入2ml冷的9.2mol/l高氯酸，不时搅拌，提取15min后加蒸馏水至10ml，混匀，离心10min，上清液倾入50ml容量瓶。再向沉淀中加入2ml4.6mol/l高氯酸，搅拌提取15min后加水至10ml，混匀后离心10min，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀1～2次，离心，合并离心液于50ml容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。3.测定取待测样品提取液1.0ml于试管中，再加蒽酮试剂5ml，快速摇匀，然后在沸水浴中煮10min，取出冷却，在620nm波长下，用空白调零测定光密度，从标准曲线查出糖含量（μg）。四、结果计算式中。c——从标准曲线查得葡萄糖量，μg。vt——样品提取液总体积，ml。v1——显色时取样品液量，ml。w——样品重，g。0.9——由葡萄糖换算为淀粉的系数。Ⅱ碘-淀粉比色法一、原理对于淀粉含量较少的植株样品，也可采用碘–淀粉比色法。淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中，当碘化钾和硝酸钙共存时，碘能以碘–淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。将此沉淀溶于碱液，并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液进行比色。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物材料。（二）试剂1.80％硝酸钙溶液。2.0.5％碘液。称5.00g结晶碘和10.00g碘化钾，放入研钵混合干研，然后加10ml蒸馏水研至全部碘溶解，将溶液全部转入1000ml容量瓶定容后，贮于磨口试剂瓶。3.5％含碘硝酸钙溶液。取10ml80％的硝酸钙溶液，加入160ml水再加入3ml0.5％的碘液混匀，现用现配。4.标准淀粉溶液。称取纯淀粉50mg于研钵中，加3ml80％硝酸钙溶液，研细并转移到100ml的三角瓶中，用15ml80％的硝酸钙溶液冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中。将三角瓶置于沸水浴中煮沸5min，冷却后全部转入50ml容量瓶中并定容。此液为1mg/ml的淀粉标准液。5.0.1mol/lnaoh。6.0.1mol/lhcl。（三）仪器设备分析天平，研钵，容量瓶，量筒，三角瓶，水浴，小漏斗，电炉，离心机，离心管，试剂瓶。三、实验步骤1.称取1～3g叶片，剪碎放入研钵，加5ml80％的硝酸钙溶液，研磨成糊状移入100ml的三角瓶中，用10ml80％的硝酸钙冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中，瓶口盖上小漏斗，在沸水浴上煮沸3～5min（叶片含淀粉少的3min，含淀粉多的5min），使样品中淀粉转变为胶体溶液。2.给三角瓶中加20ml蒸馏水，混合液转入离心管中离心（2000～3000rpm）2～3min，将离心后的淀粉胶体浑浊液移入100ml容量瓶（淀粉含量少时，可移入50ml容量瓶），三角瓶及离心沉淀物用5～10ml热蒸馏水冲洗并同样离心，离心液并入容量瓶中（共洗2～3次）定容，即为淀粉提取液。3.取5～10ml淀粉待测液，加入到盛有2ml0.