小鼠基因型鉴定原理.docx

第PAGE\*Arabic\*MERGEFORMAT5页共NUMPAGES\*MERGEFORMAT5页小鼠基因型鉴定原理篇一：小鼠表型鉴定小鼠发育阶段特点出生为红色（若要换窝，要带一点周围的木屑，否则鼠妈不认识）→生后4-5天开始长毛→生后7天剪脚趾和剪尾巴做基因型鉴定→生后10天开眼→生后20天断奶→生后40天可以合笼→怀孕20天后产崽。小鼠性别判断。雌鼠的后腹部左右两侧有明显的乳头。小鼠发情判断。雌鼠一般出生后40天开始发情，发情时肛门（或阴道口）为红色。之后一直处于可以生育阶段。一般繁殖合笼为一雄配二三雌，一般不将两只雄鼠和一只雌鼠放在一起，因为两只雄鼠会打架。在做完基因型鉴定之后要尽快把不需要的小鼠处死，因为小鼠太多雌鼠会奶水不足，当雌鼠奶水不足时，会吃掉鼠崽。小鼠基因型鉴定配方：buffera0.5medta（ph8.0）10mol/lnaoh双蒸水定容到250ml室温储存100ul625ulbufferbtribase浓盐酸调ph到3.0室温储存40mm步骤：1.小鼠出生7天后剪尾巴（一小点就行），若出生30天后剪耳朵；2.75ulbuffera100℃煮40min，每20min摇一次；3.225ulbufferb12000r/min3min，上清为dna，跑pcr鉴定。篇二：转基因小鼠鉴定实验转基因小鼠鉴定实验在刚出生产出的鼠仔中，属转基因小鼠者，约占全部仔小鼠的20％-30％。因此，对转基因小鼠必须进行鉴定筛选。1.转基因整合检测鉴定转基因小鼠最简单的方法是从小鼠尾尖提取基因组dna，检测其基因型。检测方法包括pcr和shouthern杂交。（1）基因组dna的提取：1）将离乳期小鼠（>4周龄）麻醉标记。2）用一只手抓住小鼠，另一只手持消毒剪剪下约1cm的鼠尾。（2）pcr检测。转基因的初始筛选通常采用pcr检测技术。该技术操作简便、快速、费用低而有效，适合大量标本的分析。由于该技术特别敏感，可能产生假阳性结果。因此，在操作过程中必须特别小心，避免质粒dna或其它标本的基因组dna的污染。假阳性的产生对转基因小鼠的筛选工作将是致命的。pcr实验应采用双复管，甚至三复管。阳性结果最好用southern杂交技术进一步证实。（3）southernblot分析。该技术虽然没有pcr技术那样敏感，且费力费时，但是避免了因污染导致假阳性结果的麻烦，可以得到目的基因整合后的基因组、整合位点数目、转基因拷贝数等的确切信息。southernblot的实验操作参见第一章的第八节。2.转基因表达检测转基因整合检测是确定目的基因是否整合到了小鼠的基因组中，同时可确定整合的位点和拷贝数，这在遗传学上是十分重要的。而转基因表达检测是确定目的基因在转基因小鼠器官组织中表达的时空分布。其检测包括rna分析技术和蛋白质检测技术。篇三：t7e1酶切法进行基因敲除小鼠的基因型鉴定t7e1酶切法进行基因敲除小鼠的基因型鉴定：下面是举例：t7e1酶切法检测突变体小鼠实验步骤：1、pcr扩增targetsite周围序列（一般设计500bp左右，targetsite最好不位于中央，这样将酶切出两条大小不同的带）。2、将实验组与对照的pcr产物按如下体系进行退火处理（95℃5min，自然冷却至室温）3、理中，37℃反应30min后跑2%的琼脂糖凝胶电泳检测分析突变效果。根据talen形成的突变位置和pcr引物的位置，pcr产物为642bp，若发生突变后，用t7e1酶切，将产生约为：520bp和120bp的两条突变型的带。下面三种情况来判断小鼠或细胞为野生型、杂合子、纯合子1）纯合子小鼠。样品小鼠的pcr产物自我杂交，经t7e1酶切，只有一种带型（与野生型带大差不多）；而样品小鼠的pcr产物与野生型鼠pcr产物杂交，出现两种带型（突变体带+野生型带）。2）杂合子小鼠。样品小鼠的pcr产物自我杂交，经t7e1酶切，出现两种带型（突变体带+野生型带）；而样品小鼠的pcr产物与野生型鼠pcr产物杂交，也出现两种带型（突变体带+野生型带）。3）野生型小鼠。样品小