实验六-微生物大小及数量的测定省公开课一等奖全国示范课微课金奖PPT课件.pptx

试验6酵母菌大小测定一、试验目标和内容目标：学会测微尺使用和计算方法及对单细胞微生物测量。内容：1.学会并掌握测微尺使用。2．测定酿酒酵母菌体大小。二、试验材料和用具酿酒酵母菌悬液显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。镜台测微尺目镜测微尺每格实际代表长度随物镜放大倍数而改变，也会因使用不一样显微镜而产生误差，所以在使用前必须用镜台测微尺进行校正。目镜测微尺校正三、操作步骤l．目镜测微尺标定把目镜上透镜旋开，将目镜测微尺轻轻放在目镜隔板上，使有刻度一面朝下。将镜台测微尺放在显微镜载物台上，使有刻度一面朝上。先用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺刻度后，转动目镜，使目镜测微尺刻度与镜台测微尺刻度相平行，并使两尺左边一条线重合，向右寻找另外一条两尺相重合直线。2．标定公式：计算两刻度间目镜测微尺格数和镜台测微尺格数。因为镜台测微尺刻度每格长10µm，所以可得：目镜测微尺每格长（μm）=三、操作步骤3．菌体大小测定将镜台测微尺取下，换上酿酒酵母玻片标本，分别在低倍镜和高倍镜下找到目标物，测量10～20个菌体长和宽占目镜测微尺格数，再以目镜测微尺每格长度计算出菌体长和宽。统计结果,求出平均值。镜台测微尺玻片很薄，如需标定油镜头时，要格外注意，以免压碎镜台测微尺或损坏镜头。思索题为何不一样放大倍数目镜和物镜必须分别进行标定？酵母菌数量测定一、目标要求1．明确血球计数板计数原理。2．掌握使用血球计数板进行微生物计数方法。二、基本原理用血球计数板在显微镜下直接计数是一个惯用微生物计数方法。该计数板是一块特制载玻片，其上由四条槽组成三个平台；中间较宽平台又被一短横槽隔成两半，各列有一个方格网，中间大方格即为计数室。计数室刻度普通有两种规格，一是大方格分成25个中格，而每个中格又分成16个小格；另一个是大格分成16个中格，而每个中格又分成25个小格，每个大格中小格都是400个。每一个大格边长为lmm，面积为lmm2，盖玻片与载玻片之间高度为0.lmm，故计数室容积为0.lmm3。血球计数板计数计数时，通常数五个中格总菌数，然后求得每个中格平均值，然后再换算成lml菌液中总菌数。假如是25个中方格计数板,1mL菌液中总菌数=A/5×25×104×B=50000A·B（个）A为五个中方格中总菌数，B为菌液稀释倍数.假如是16个中方格计数板，1mL菌液中总菌数=A/5×16×104×B=3A·B（个）（三）器材1．菌种酿酒酵母2．仪器或其它用具血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细滴管。（四）操作步骤l．菌悬液制备以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当菌悬液。2．镜检计数室在加样前，先对计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。3．加样品将清洁干燥血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌毛细滴管将摇匀酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘凹槽滴加,菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，普通计数室均能充满菌液。取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。4．显微镜计数加样后静止5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。每个计数室选5个中格(可选4个角和中央一个中格)中菌体进行计数。压线菌体普通记上不记下,记左不记右。如遇酵母出芽，芽体大小到达母细胞二分之一时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得平均数值来计算样品含菌量。5．清洗血球计数板使用完成后，将血球计数板在水龙头用水冲洗洁净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其它沉淀物。若不洁净，则必须重复洗涤至洁净为止。思索题1.计数板法特点和适用范围怎样？2.计数时如看不到格线怎样处理？