人参低聚肽对急性酒精中毒大鼠的作用研究.docx

人参低聚肽对急性酒精中毒大鼠的作用研究刘睿任金威陈启贺李迪毛瑞雪刘欣然乌兰杜倩李勇摘要：目的：评价人参低聚肽（ginsengoligopetides，GOPs）对急性酒精中毒大鼠的作用效果。方法：根据体重将大鼠随机分为酒精模型组、乳清蛋白组（250mg/kg·BW）和4个GOPs剂量组（62.5、125、250、500mg/kg·BW），另设1个正常对照组，每组10只。GOPs灌胃30d后，以4g/kg·BW浓度灌胃染毒造成大鼠急性酒精中毒模型（翻正反射实验为7g/kg·BW），进行行为学实验（包括翻正反射、转棒和网上攀附实验）、检测血乙醇浓度，并检测大鼠肝脏乙醇脱氢酶（ADH）、乙醛脱氢酶（ALDH）的活性。结果：GOPs干预能明显减少急性酒精中毒大鼠的翻正反射消失比率，延长网上攀附时间，增加醉酒大鼠在转棒上的停留时间，降低血乙醇浓度及提高肝脏ADH、ALDH活性。结论：GOPs可以通过加速酒精在体内的代谢，加强肝脏乙醇代谢酶活性，改善酒精引起的行为异常，从而对急性酒精中毒大鼠具有保护作用。关键词：人参低聚肽;急性酒精中毒;翻正反射;酒精代谢酶急性酒精中毒在日常生活中极为常见，尤其是在年轻人群中，醉酒造成了很多社会负面效应和健康问题[1-3]，因此探讨如何有效预防急性酒精中毒和保护机体免受急性酒精中毒的伤害已成为当务之急。2012年9月中国批准人参为新资源[4]。人参低聚肽（GOPs）是从人参中利用生物酶解技术分离得到的小分子生物活性肽类混合物，具有吸收快、水溶性高及粘度低等特点[5]。伴随着生物化学和分子生物学技术的飞速发展，有关低聚肽的研究正逐渐引起人们的重视。现代研究发现，低聚肽比单个氨基酸的吸收更有效，并能直接参与蛋白质的合成，有效提高了蛋白质的吸收利用率[6]。GOPs是安全性高且具有多种生理活性的功能性肽类物质，目前研究已证实，GOPs具有免疫调节、改善血脂异常、抗疲劳、耐缺氧、抗辐射、抗炎等多種生理作用[7-11]。本研究通过采用不同剂量的GOPs水溶液对大鼠进行为期30d的灌胃干预，以多种行为学实验及血乙醇浓度变化为依据，评价GOPs对急性酒精中毒大鼠的作用，并探讨其可能机制。1材料与方法1.1材料GOPs：为淡黄色固体粉末，主要以小分子寡肽为主，分子量小于1000Da的占97.39%，游离氨基酸含量为3.94g/100g，其中精氨酸、脯氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸含量较多，购自吉林肽谷生物工程有限责任公司。1.2主要试剂与仪器无水乙醇（分析纯）、叔丁醇（分析纯），国药集团化学试剂北京有限公司;乳清蛋白，北京中柏公司（其蛋白含量为78%）;乙醇脱氢酶（ADH）、乙醛脱氢酶（ALDH）检测试剂盒，北京麦格泰克科技有限公司;DXP-2大小鼠转棒仪，中国医学科学院药物研究所;低温高速离心机，德国Eppendorf公司;AdventurerTM通用型分析天平，美国OHAUS公司;数显电热恒温水浴箱，上海跃进医疗器械厂;352型酶标仪（芬兰，LabsystemsMultiskanMS）;岛津GC-2010气相色谱仪。1.3实验动物及分组SPF级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠[体重（200±20）g]262只，由北京大学医学部实验动物中心提供（实验动物生产许可证号：SCXK（京）2016-0010;实验动物使用许可证号：SYXK（京）2016-0041）。动物饲养在北京大学医学部实验动物科学部，动物实验环境设施（屏障环境）合格证书：医动字第01-2055。饲养环境为屏障环境，温度为（22±2）℃，相对湿度为50%～60%，昼夜循环时间为12h。动物实行分笼饲养，每笼3只，自由饮水、进食。适应性喂养5d后，根据体重将大鼠随机分为四大组，即翻正实验组、网上攀附实验组、转棒实验组和血乙醇浓度检测组;每个实验组再分为6个干预剂量亚组：即酒精模型组、乳清蛋白组（250mg/kg·BW），GOPs低、中、高剂量组（62.5、125、250、500mg/kg·BW），每个干预亚组10只大鼠（考虑到大剂量酒精容易造成大鼠死亡，翻正实验每组12只）。另设1个正常对照组（10只）。每日经口灌胃干预，正常对照组和酒精模型组给予蒸馏水，乳清蛋白组和GOPs剂量组给予相应浓度受试物（均用蒸馏水配制）。动物每周称重2次，根据体重及时调整灌胃量，干预时间为30d。1.4方法1.4.1酒精灌胃造模干预30d结束后，各组动物禁食不禁水6h后，分别用生理盐水（正常对照组和酒精模型组）、乳清蛋白水溶液、GOPs水溶液灌胃，30min后，给予50%（v/v）酒精4g/kg·BW（翻正实验剂量为7g/kg·BW）灌胃造模，正常对照组给予等体积生理盐水（17.5mL/kg·BW）。酒精灌胃30min后，进行行为学实验（翻正反射、转棒和网上攀附实验