菌种分离筛选.ppt

第六章微生物菌种的分离筛选第一节菌种的分离简介二、分离思路定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。采样：有针对性地采集样品。增殖：人为地通过控制养分或培养条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。分离：利用分离技术得到纯种。发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。菌种筛选主要步骤原种斜面↓确定发酵培养基础条件筛选↓初筛（1株1瓶）↓复筛（1株3～5瓶）↓结合初步工艺条件摸索再复筛（1株3～5瓶）↓3～5株↓单株纯种分离↓生产性能试验↓→毒性试验菌种鉴定第二节分离样本的采样2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。3、采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。二根据微生物生理特点采样1、根据微生物营养类型2、根据微生物生理特性三特殊环境下采样第三节含微生物样品的富集培养二、控制培养条件pH值的控制细菌、放线菌：pH7.0～7.5酵母菌、真菌：pH6.5～7.0温度的控制通气量的控制三抑制不需要的菌类如使用不同类型的抗生素、高温、高压等条件，抑制不需要的菌类。第四节微生物的培养分离1.稀释平皿分离法1.稀释平皿分离法2.平皿划线分离法a.连续划线分离法b.分区划线分离法（四）筛选（五）毒性试验培养分离一、成功的分离培养方法三、将生态学方法用于培养分离的一般思路要点5．列出生物系统中有用的自然底物，如森林土壤中的几丁质、葡萄表皮的果胶；6．根据上述1-5项中所获得的数据，设计分离方法，即选择适宜的稀释液、底物、试样、天然浸出汁和培养条件；7．用标准方法作对照来评价生态学分离方法；8．根据待检材料的生态参数需要，修改已知的方法；9．运用特定的富集方法，富集那些可能具有筛选意义的微生物类群。四、自然界中细菌的分离(一)采样和采集方法采样的注意事项5、采好的样应及时处理，暂不能处理的也应贮存于4℃下，但贮存时间不宜过长。这是因为一旦采样结束，试样中的微生物群体就脱离了原来的生态环境，其内部生态环境就会发生变化，微生物群体之间就会出现消长(二)生态学参数及培养基的组成原则3、所有分离培养基中都应含有抗真菌剂(如放线菌酮和制霉素)，掺加浓度一般为50μg／m1，以抑制真菌的生长。4、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l、2天。5、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应调节到与试样的生态系统参数值相近。二、分离用刚果红染色法鉴定筛选降解纤维素的菌株五、放线菌的分离培养基的组成原则放线菌的分离次代培养及纯化放线菌菌落形态六、真菌分离4、选择性富集：是通过一定的方式使样本中一种或一群微生物数量上的增加而利于分离的一种技术。富集可以是种水平的，如通过营养要求的改变来富集分离镰刀菌；也可以是组成群水平的，如以纤维素为唯一碳源的选择性培养基可选择性富集所有能降解纤维素的纤维素裂解微生物。5、在分离培养基中加入一定的抗生素即可有效地抑制细菌生长及菌落形成。真菌的分离方法微生物菌种分离实例实验原理纤维素与纤维素酶纤维素酶是一种复合酶，一般认为至少包含三部分，C1,Cx,和葡萄糖苷酶组成。前两种使纤维素分解成纤维二糖，第三种将纤维二糖分解成葡萄糖，正是在这三种酶的协同作用下，纤维素最终被分解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养。纤维素分解菌的筛选纤维素-刚果红混合培养基刚果红染色法常用的刚果红染色法有两种：一是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，二是倒平板时就加刚果红。方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于实验材料和琼脂都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊,无明显影响.方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。短时间培养也无大碍。1.实验材料及方法1.1样品：从校园找到的竹子下的土壤、松树下的土壤、混合土；熊猫粪；牛粪。1.2实验所用的器材：培养皿，250mL锥形瓶，无菌称量瓶，滤纸，药匙、1mL和10mL的移液管、电子秤、无菌培养皿、涂布器、解剖镜、显微镜、接种针、温箱等1.3实验用培养基配方及配制注意事项1.3.1、选择培养基:纤维素分解细菌--赫奇逊培养基:CMC,KH2PO41.0g、MgSO4·7H2O0.3