细胞破碎技术.pptx

细胞破碎技术前言破碎细胞的方法和技术细胞壁的组成和结构细菌细胞壁的组成细菌细胞壁的组成细菌细胞壁的组成细菌细胞壁的组成酵母细胞壁酵母细胞壁酵母细胞壁真菌细胞壁细胞壁组分与真菌分类真菌细胞壁真菌细胞壁细胞壁结构与破碎细胞壁结构与破碎破碎分析1.直接测定法2.间接测定法(1)稀释法(1)稀释法(2)质量平衡法(2)质量平衡法(3)电导测定法渗透休克法原理应用超声破碎法设备和原理设备和原理应用与局限应用与局限应用与局限大规模应用的对策高压释放匀浆法设备与机理设备与机理设备与机理影响破碎的因素影响破碎的因素影响破碎的因素影响破碎的因素影响破碎的因素影响破碎的因素冰冻压缩释放破碎法设备与机理设备与机理设备与机理技术适用性影响破碎的因素影响破碎的因素大量破碎微生物细胞的方法球磨破碎技术球磨破碎技术设备及原理设备及原理设备及原理设备及原理设备及原理设备及原理设备及原理细胞破碎原理及动力学细胞破碎原理及动力学影响细胞破碎的因素及其相互关系影响细胞破碎的因素及其相互关系细胞浓度细胞浓度细胞浓度细胞浓度细胞浓度球磨剂球磨剂球磨剂球磨剂球磨剂球磨剂搅动速度搅动速度搅动速度叶轮结构叶轮结构叶轮结构叶轮结构叶轮结构叶轮结构流速流速流速时间温度几个典型实例几个典型实例几个典型实例几个典型实例研磨法原理操作干燥提取法该法适合提取酵母中比较稳定的酶。通过干燥使细胞膜的渗透性改变，从而使细胞内某些物质容易抽提。干燥的方法包括空气干燥、真空干燥、冷冻干燥和水溶性有机溶剂脱水干燥等。空气干燥一般是在25-30℃或高至35-40℃的干燥气流中吹干，将干细胞再悬浮在3-5倍的水或缓冲液中，室温下搅拌2-3h抽提。抽提的缓冲液pH在8-9时比7.0时抽提的可溶性蛋白质较多；如果目的蛋白质稳定性较高，可在40-45℃下抽提；如果目的蛋白质不稳定，需在较低的温度下处理。一般来说，空气干燥的细胞提取的蛋白质要比真空干燥和冷冻干燥的多，这是由于在空气干燥时细胞会发生自溶的原故。在有机溶剂脱水干燥时使用的有机溶剂有丙酮及二氧六环。通常将十倍于细胞悬浮液的有机溶剂预冷至-20℃，在搅拌下将细胞悬浮液缓慢倒入有机溶剂，停止搅拌，静止使之自然沉降，倾去上清，用布氏漏斗真空过滤，滤饼用冷的有机溶剂洗涤，抽干后，立即放入内放有石蜡真空干燥器，吸附残余的有机溶剂。干燥的细胞可采用上述的抽提方法进行处理。由于有机溶剂将细胞膜上的脂类物质去除，改善了通透性，有利于酶的提取。冻融法此法是利用细胞含有大量水份，在快速冷冻时，细胞内水很快结晶，形成大量晶核，体积增大，将细胞胀破，达到破碎细胞的目的。一般是将40-70%的细胞悬浮液放入低温冰箱使之快速冷冻，冻结后，取出在室温下融化，然后再冷冻，反复进行，通常需三次以上，酶的释放率才可能达到满意。此法主要适用于大肠杆菌和细胞壁较薄的细菌，特别适用于位胞间质的酶的释放。冻融法十分简便，不需特殊设备，在实验室中使用很方便，但耗时，耗能，大规模应用困难。化学法有机溶剂法表面活性剂法表面活性剂法变性剂法螯合剂法碱处理法酶处理法酶处理法酶处理法应用与发展应用与发展应用与发展应用与发展应用与发展各种细胞破碎方法的比较各种细胞破碎方法的比较细胞破碎技术的发展由上游解决的技术由上游解决的技术由上游解决的技术由上游解决的技术由上游解决的技术与下游技术结合谢谢！