重组DNA导入受体细胞.pptx

转化过程中，这些分子同时被转移到宿主细胞内。未连接的分子即使被细菌摄取，只有在特殊的条件下才能复制，寄主的酶可降解这些DNA片段。自连的载体和错误插入的重组质粒可以进入宿主细胞进行正常的复制一、转化方法a.热激法转化感受态细胞b.PEG介导的原生质体转化c.高压电穿孔法转化d.显微注射法转化e.接合转化f.噬菌体转染大肠杆菌常用转化方法的比较一）受体细胞应具备的条件二）大肠杆菌感受态的制备与转化1、热激法转化感受态细胞2、氯化钙法转化在某些情况下，CaCl2只影响DNA的结合，并不影响细胞的吸收，当DNA分子加到处理的细胞内，仍然吸附在细胞的外部，并没有转化到细胞质中，将DNA带入感受态细胞的条件可提高温度到42℃。3、PEG介导的原生质体转化4、高压电穿孔法(2)影响因素脉冲的最大电压脉冲持续的时间与DNA浓度则无多大关系电穿孔转染效率主要取决于所用的细胞类型。对于不适合用传统方法转染的细胞，用电穿孔法得到的永久转化的频率约为10-4～10-5之间。5、显微注射法转化（1）真正的显微注射(truemicroinjection)法DNA是由注射针直接注入细胞（2）“穿刺”(pricking)导入法DNA是处在细胞周围培养基中，它通过穿刺形成的小孔进入细胞的内部，或是随穿刺的针头一道进入的。用显微注射法转移基因的效率明显地超出其它方法。显微注射用的受体细胞，多数是沿培养皿贴壁生长的单层细胞。6、接合转化细菌的“接合”状态接合----F+×F－染色体二、phageDNA的转化噬菌体转化大肠杆菌的方法一）λDNA的转染二）λ噬菌体的体外装配λ噬菌体体外装配的两种系统