浅谈马铃薯脱毒快繁流程步奏及配方.docx

浅谈马铃薯脱毒快繁流程步奏及配方马铃薯：(Solanumtuberosum)为茄科茄属作物．是全球重要的粮菜兼用作物。马铃薯具有生长期短、产量高、适应性强、营养丰富、耐储运的特点，因此深受生产和消费者的喜爱。但在马铃薯生产中普遍存在种性退化的问题，而病毒侵染是马铃薯退化的根源。由于马铃薯是无性繁殖作物，所以病毒侵染后会世代相传，危害逐年加重。目前，世界上公认的解决马铃薯病毒危害，防止品种退化的有效途径是茎尖离体培养。通过茎尖离体培养培育脱毒基础苗，再通过建立合理的良种繁育体系生产优良种薯是马铃薯高产、稳产、优质的可靠保证。一脱毒种薯繁育工艺流程马铃薯脱毒种薯繁育工艺流程如图所示。二脱毒技术2.1脱毒方法2.1.1外植体选择及处理外植体的选择途径一般有3条：①在生长季节从田间挖取植株种植在无菌的盆土中，温室内栽培，取其新长成枝条的芽；②从田间切取枝条，插入营养液中生长，取新抽生枝条上的芽；③块茎在室内发芽，芽经热处理(38℃)2周后再取芽。另外，定期给植株喷施内吸杀菌剂，如0.1％多菌灵和0.1％链霉素的混合液，可以有效提高灭菌效果。经过上述处理之后，要比直接取自田间枝条污染少得多。再加上茎尖分生组织又被彼此重叠的叶原基保护．只要仔细剥取，无须再进行消毒，就能得到无菌的外植体。但为保险起见，在切取外植体之前，可以先进行简单的表面消毒，一般在5％次氯酸钠中处理8～10min即可。虽然顶芽和腋芽都能作为外植体，但顶芽的茎尖生长要比腋芽的快，成活率也高，所以一般取顶芽作为外植体。2.1.2剥离茎尖和接种在超净台上的解剖镜(8～40倍)下进行茎尖剥离。解剖时必须注意使茎尖暴露的时间越短越好．以免超净台的气流风干茎尖。在材料下垫上一块湿润的无菌滤纸也可达到保持茎尖新鲜的目的。在解剖镜下用解剖针将叶片和叶原基剥掉，直到露出圆亮的茎尖生长点。将带有l～2个叶原基的茎尖切下．接种到培养基上。要注意防止交叉污染，尤其是当芽未曾进行过表面灭菌时更要谨慎。2.1.3培养对马铃薯茎尖培养来说，MS和white基本培养基都是较好的培养基，而且附加少量(0.1～0.5mg／L)的NAA或BA或二者都加，培养效果更好。只有生长点的极小茎尖的培养最好采用液体培养，多放在滤纸桥上培养。茎尖培养初期的最适光照强度为1000lx，4周后增加到2000lx，6周后增加到4000lx。培养温度21～25℃，光照时间以16h／d为宜。1个月左右茎尖再生成有可见小叶的小植株，保存部分原苗，准备扩繁用；另一部分用于病毒检测。茎尖培养时需要注意以下3个问题：①茎尖接种后基部无明显膨大，茎尖变绿，成绿色小点，这是激素浓度或温度偏低造成的；②接种后茎尖明显膨大，3～5d可见淡绿色愈伤组织，这是由于激素浓度或温度偏高，光照偏弱造成的。③培养基添加0.8mg／L的GA有利于茎尖的成活和促长，但不要浓度过高或作用时间过长，否则会使茎尖不易转绿，导致叶原基迅速伸长，生长点并不生长，整个茎尖变褐而死。2.2脱毒效果检测马铃薯经过茎尖培养脱毒后，只有部分植株是脱病毒植株。因此，在用作脱病毒原种苗之前，必须进行病毒检测证明无病毒后才能推广。在繁殖中还要不断重复检测，以防重新感染。常用的病毒鉴定方法有指示植物测定法、血清学方法和电子显微镜法。三脱毒苗快繁技术3.1继代培殖与生根培养将经鉴定无毒的马铃薯脱毒苗，采用固体与液体培养基相结合的方法进行继代增殖培养效果好。取试管苗单节切段扦插在MS固体培养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左右便可发育成5～10cm高的小植株，然后进行切段繁殖。此法速度快，每月可繁殖5～8倍。如果多茎节的试管苗接种在液体培养基上，进行浅层静止液体培养，则比固体培养基生根快，长得粗壮。便于栽植，同时省去大量琼脂，降低了生产成本，同时提高了试管苗成活率。培养基可选用MS培养基，其中的烟酸、肌醇都可以减去，琼脂浓度也可降低。在25～28℃、光照强度3000~4000lx、连续光照的条件下，切段繁殖速度很快，一般每月能增加7～8倍。另外，也可将1～2cm高的苗转人MS、IAA0.1～0.5mg／L，活性炭0.1～0.2g／L的生根培养基中培养，7～10d生根。3.2驯化移栽为增强试管苗对温室内环境条件的适应能力，移植前对试管苗要进行光、温锻炼。具体方法是：移植前7d左右，将长有3～5片叶、高2～3cm的试管苗瓶摆放在温室内的驯化畦内，畦内浇上水，畦上方半遮阳进行驯化，以防止强光、高温灼伤试管苗和维持试管苗周围的温度。移至温室的试管苗，尽管仍处于封口的瓶内，但由于封口膜透气性好，瓶内的湿度下降，使试管苗的茎叶变硬，加上光照增强，茎秆变粗，叶片肥厚浓绿，有效地抑制了徒长和真菌的侵染，从而提高了试管苗的抗逆性和对环境条件变化的适应能力，提高了移栽成活率。炼苗期温室内的温度一般要求白天