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核酸的生物合成主题知识讲座中心法则12.1DNA半保留复制母链核酸的生物合成主题知识讲座12.2DNA复制过程核酸的生物合成主题知识讲座DNA复制方向DNA复制所需要原料?n1dATP引物核酸的生物合成主题知识讲座DNA聚合酶I:催化DNA链延长;外切酶(从3‘或5’端把DNA链水解)DNA聚合酶II:催化DNA聚合反应;外切酶活性(无5‘-3’外切酶活力);活性低DNA聚合酶III:DNA链聚合;活性最强。DNA聚合酶(E.coli大肠杆菌)DNA聚合酶(yeast酵母菌)*模板*dNTP*引物(3’-OH)*DNA链合成方向(5’-3’)*合成两条子链是互补12.3双链DNA复制分子机制5‘几个主要概念引物DNA连接酶后随链合成过程:参加大肠杆菌染色体DNA复制主要蛋白质12.4真核细胞DNA复制12.5DNA损伤与修复错配核苷酸删除或加入DNA重组错配修复光复活修复切除修复错配修复光复活修复光复活酶(可见光)切除修复(暗修复)限制性内切酶高专一性(DNA)特异结合位点(4~8bp)质粒——比较小双链环形DNA。只占细胞DNA一小个别,但常含有一些抗性基因。纯化质粒常见作克隆载体。Polymerasechainreaction(PCR)体外模拟自然DNA复制过程核酸扩增技术,即无细胞分子克隆技术。以待扩增两条DNA链为模板,由一对仍合成寡聚核苷酸引物介导,经过DNA聚合酶酶促反应,快速体外扩增特异DNA序列。(扩增数百万倍)操作简单,快速,特异,灵敏