微生物培养技术专家讲座.pptx

微生物菌落：细菌营养类型一、微生物分离和纯培养1、培养基定义：（书本）固体培养基用于菌种分离、判定菌落等半固体培养基可观察微生物运动液体培养基惯用于发酵工业。固体培养基半固体培养基液体培养基选择培养基判别培养基称量：准确地称取各种成份。牛肉膏比较黏稠，能够用玻棒挑取，放在称量纸上称量。牛肉膏和蛋白胨都轻易吸潮，称量时动作要快速，称后要及时盖上瓶盖。（2）.溶化：①加水加热熔化牛肉膏将称好牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯加入少许水，加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。②加入蛋白胨和氯化钠，用玻棒搅拌，使其溶解；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不停用玻棒搅拌，目标是预防琼脂糊底而造成烧杯破裂。待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。倒平板技术（二）无菌技术A、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6minB、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15minC、化学药剂消毒法:用酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源D、射线消毒法（1）定义：使用强烈理化原因杀死物体内外全部微生物，包含芽孢和孢子。C、高压蒸汽灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.（三）接种技术（书本）稀释涂布平板法1、微生物试验室培养基本操作程序（1）制备牛肉膏蛋白胨培养基（2)配制培养基：计算称量；熔化；调PH；分装；灭菌；倒平板（3）接种：平板划线法；稀释涂布平板法。（4）培养：倒置，37℃恒温箱，12和24h。（5）纯化培养：倒置，37℃恒温箱，24h。（6）菌种保藏：暂时、长久保留法。菌种保留二、培养基对微生物选择作用（一）、基础知识（二）、筛选惯用刚果红染色法有两种（1）土壤取样（2）选择培养（可省略）（3）梯度稀释（4）涂布培养（5）挑选产生透明圈菌落（6）微生物培养（纯培养）三、测定微生物数量（一）测定微生物数量方法2、间接计数法：（一）测定饮用水中大肠杆菌数目1、土壤取样3、样品稀释在以尿素为惟一氮源培养基中加入酚红指示剂，指示剂变红，就能够准确判定该种细菌能够分解尿素。当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300平板进行计数。在同一稀释度下，最少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并依据平板所对应稀释度计算出样品中细菌数目。菌落数选择：普通选择菌落数在30～300平板上进行计数。当只有一个稀释倍数平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落乘以稀释倍数；若有两个稀释倍平均菌落数均在30～300之间，则按二者菌落总数之比值来决定：若比值小于2应采取二者平均数，若大于2，则取其中较小菌落总数。