实验斑马鱼的急性毒性实验专家讲座.pptx

二、试验原理在要求条件下，使鱼接触含不一样浓度受试物水溶液，以96h为一个试验周期，在24h、48h、72h、96h时统计试验鱼死亡率，确定鱼类死亡50%时受试物浓度（LC50)。经过鱼类急性毒性试验能够评价受试物对水生生物可能产生影响，以短期暴露效应表明受试物毒害性。鱼类急性毒性试验不但用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检验废水处理有效程度，也为制订水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。我国可采取试验鱼有四大养殖淡水鱼（青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼）、金鱼、鲫鱼、野生食蚊鱼、斑马鱼等。本试验选取斑马鱼作为试验材料斑马鱼(zebrafish)是一个小型热带淡水鱼，最早是作为胚胎发育生物学和遗传学试验动物模型，被广泛地利用于早期胚胎发育基因表示调控研究。三、试验材料与试剂1、斑马鱼，购自绍兴花鸟市场，体重0.15g左右，体长2.8cm，试验前在充分曝气自来水中驯养7天。2、重铬酸钾（分析纯）3、试验用水选取曝气3天自来水，硬度为60mg/l四、试验步骤1、预试验分别配制吡虫啉浓度为1、10、100、1000mg/L处理液10L置于各塑料桶中，每桶放斑马鱼6条，每24h换一次试验处理液，试验连续96h。每日最少两次统计各容器内死鱼数，并及时取出死鱼。求出24h100%死亡浓度和96h无死亡浓度。2、正式试验依据预试验得出结果，分别配制吡虫啉浓度为280mg/l、294mg/l、308mg/l、322mg/l、336mg/l、364mg/l处理液10L，以不加吡虫啉自来水作对照组。每个处理组放斑马鱼10条。每24h换一次试验处理液，试验开始后3h或6h观察各处理组鱼情况，并统计试验鱼异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积等）。在24h、48h、72h、96h后检验受试鱼情况。假如没有任何肉眼可见运动，如鳃扇动、碰触尾柄后无反应等，即可判断该鱼死亡。观察并统计死鱼数目。另外，试验结束时，对照组死亡率不得超出10%，不然试验结果不可靠，需再次试验证实。五、试验汇报1．数据处理以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率曲线。用直线内插法或惯用统计程序计算出24h、48h、72h、96h半致死浓度（LC50）值。假如试验数据不宜计算LC50，可用不引发死亡最高浓度和引发100%死亡最低浓度估算LC50近似值，即这两个浓度集合平均值。2、化学物质急性毒性分级依据LC50值大小，能够将化学物质急性毒性分为剧毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5级，以下表所表示：鱼类急性毒性试验毒性分级标准鱼起始LC50/（mg/L）＜11~100100~10001000~10000＞10000剧毒高毒中等毒低毒微毒3、编写汇报在试验汇报中应包含：试验名称、目标、试验原理、试验准确起止日期，以及：（1）试验鱼种名、起源、体重、体长、健康和驯化情况。（2）受试物质名称、起源、物化性质和保留方法。（3）试验用水起源、物化性质和试验前处理等。（4）试验溶液浓度与配置方法、试验温度。（5）试验条件，如容器形式、试验液体积与深度、受试生物数目。（6）计算试验开始后24h、48h、72h、96h时LC50值，及其毒性分级。