疫苗制造基本程序专家讲座.pptx

项目一细菌性灭活疫苗制造项目二细菌性活疫苗制造项目三病毒疫苗制造项目一灭活细菌疫苗通用制造程序基本流程一、细菌性灭活疫苗制造（二）菌液培养（三）灭活（四）浓缩项目二弱毒菌种多系冻干品，由中国药品生物制品检定所或中国兽药监察所传代、判定、保留与分发，少数由国家指定单位判定、保留与供给。菌种使用前应按规程要求进行复壮、挑选，并作形态、特征、抗原性和免疫原性判定，符合标准后方可用于制苗。将检定合格菌种接种子于要求培养基，按要求条件增殖培养，经纯粹检验及相关检验合格者即可作为种子液。种子液通常在0～4C可保留2个月，在保留期内可作为菌苗生产批量种子使用。按1%～3%量将种子液接种于培养基，然后依不一样菌苗要求进行培养。如猪丹毒弱毒菌须在在深层通气培养中加入适当植物油作消泡剂，通入过滤除菌热空气进行培养制造菌液如人用炭疽活疫苗、卡介苗经固体表面培养完成后须按要求要求将菌苔洗下制成菌液菌液于0～4C暗处保留，待抽样经纯粹、活菌数等检验合格后使用。经检验合格菌液，按要求百分比加入保护剂配苗，充分摇匀后随即进行分装，分装量必须准确。分装好菌苗快速送入冻干柜进行预冻、真空干燥，冻于完成后马上加塞、抽闲、封口，移入冷库保留，并由质检部门抽样检验。流程图1——细菌疫苗制造工艺流程项目三一、病毒性禽胚培养疫苗制造（二）种毒与毒种继代（三）接毒与收获鸡胚接毒后培养增殖时间和温度、湿度以及收获标准与内容物依不一样病毒和不一样疫苗而异。如鸡新城疫I系疫苗，接毒后于38.5~39C、相对湿度60%~70%条件培养增殖，搜集接毒后24~48h内死亡胚，置0~10C冷却4~24h，收获胚液，进行无菌检验，供制备湿苗用。也可收获胚液、胎儿及绒毛尿囊膜混合制成乳剂制备冻干苗。鸭瘟鸡胚化弱毒疫苗，则搜集接毒后48~120h内死亡鸡胚，冷却后采取绒毛尿囊膜、尿囊液、胎儿制造冻干苗用。按要求收获胚液、胎儿和绒毛尿囊膜乳剂经无菌检验合格后即可进行配苗。1.湿苗通常于鸡胚液内，按每毫升加入青霉素和链霉素500~1000U，放置0~10C冷暗处处理后分装。2.冻干苗经无菌检验后合格胚液或胚液、胎儿、绒毛尿囊膜乳剂，按百分比加入保护剂，充分混合后滤过，于滤液内按每毫升加入青、链霉素500~1000U，混合后分装冻干。3.灭活苗收获鸡胚液经无菌检验及毒价测定合格后，按要求百分比加入平衡液，按不一样病毒灭活温度、时间进行灭活，加入对应佐剂，制备成灭活疫苗，放置4-10C保留。流程图2——病毒性禽胚疫苗制造工艺流程二、病毒性细胞培养疫苗制造制造疫苗用细胞大致为原代细胞和传代细胞两类，依据病毒种类、疫苗性质与工艺流程选择不一样细胞。选择依据包含：病毒适应性高、毒价高、细胞起源方便、制备简单、生命力强。如猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞疫苗采取犊牛睾丸原代细胞；脊髓灰质炎活疫苗选择vero细胞；狂犬病弱毒细胞适应疫苗采取BHK21细胞增殖病毒等。（四）接毒与收获（五）配苗流程图3——病毒性细胞疫苗制造工艺流程三、病毒性动物组织疫苗制造种毒既可用抗原性优良、致死力强自然毒株脏器组织毒或强毒株增殖培养物，也可用弱毒株组织毒种。不论何种种毒都须经纯粹、抗原性和免疫原性检验合格后使用。接种路径依病毒性质和目标而异，比如猪瘟结晶紫苗，采取猪肌肉注射血液毒种；牛瘟兔化弱毒疫苗，以兔耳静脉注射脾淋毒种；狂犬病疫苗，用兔脑毒种接种绵羊脑内路径感染。几个动物惯用接种路径以下：1.脑内注射：颅前后中线5mm平行线与瞳孔横线交叉处。2.静脉注射：家兔由耳静脉注入；鸡自翅下肢静脉注入。3.肌肉注射：选择腿部、胸部、臀部等肌肉丰满处注射。4.皮下注射：家兔和豚鼠可选择在腹部或后腿内注射。5.腹腔注射：家兔与豚鼠可选腹股沟处刺入腹腔。动物在接种感染后应天天观察和检验要求各项指标，指标或项目因不一样病毒而异。常规观察、检验项目如食欲、精神和活动状态、体温、粪便、尿和血液改变等。依据观察征象和检验结果选出符合要求发病动物按要求方式剖杀，采取搜集含毒量高器官组织。如猪瘟结晶紫疫苗采取发病猪血液制备；兔出血症组织灭活疫苗采集病兔肝脏生产；狂犬病疫苗利用发病羊羊脑组织制造。1．组织灭活疫苗采取收获组织经无菌检验及毒价测定合格后，按要求百分比加入平衡液和灭活剂（甲醛、酚、结晶紫等）制成匀浆，然后按不一样病毒灭活温度、时间进行灭活。如狂犬病疫苗配制按脑组织1:4加入含有甘油及1%酚蒸馏水，于360.5C灭活7天制成；猪瘟结晶紫疫苗配制，按血毒4份，结晶紫甘油溶液1份混合，于37C~38C灭活6~8天。2.弱毒组织疫苗在无菌操作下剔除脏器上脂肪与结缔组织等，称重后剪碎，加入适最保护剂制成匀浆，然后滤过扣除残渣量，再按滤液中实际组织量计算稀释倍数，加入余量保护剂和青链霉素500~1000U(g/ml)，充分摇匀后置0~4