细菌的分离接种和培养专家讲座.pptx

试验五细菌分离、接种和培养目标要求试验原理试验材料试验步骤操作规范示例作业一、目标要求掌握从环境（土壤、水体、活性污泥等）中分离和纯化微生物方法和原理；倒平板；细菌纯种分离：稀释混合平板分离法、稀释涂布平板分离法和平板划线法；接种技术；无菌操作技术；在自然界中，不一样种类微生物绝大多数都是混杂生活在一起，为了生产和科学研究需要，当我们希望取得某一个微生物时，就必须从混杂微生物类群中分离出它，以得到只含有这一个微生物纯培养物，这种取得纯培养物方法称为微生物分离与纯化。为了取得纯种微生物，普通依据该微生物营养或培养特点(微生物对营养、酸碱度、氧等条件)，或对某种抑制剂耐受性不一样，或对某种环境条件要求不一样，从而制作或设置一些选择性培养基，或选择性培养条件，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或划线法分离，纯化该微生物，直至得到该纯种菌株。三、试验试剂与器材土壤样品（环境样品）牛肉膏蛋白胨培养基；无菌试管、无菌三角瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿；超净工作台（一）稀释混合平板法1.土壤稀释液制备①称取土样10g，放入盛90ml无菌水三角瓶中，振荡15～20分钟，使微生物细胞分散，静置约20～30秒，即成10-1土壤悬液。②另取装有9ml无菌水试管，编号为10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，用无菌吸管吸收10-1土壤悬液lml，加入编号10-2无菌试管中，吹吸三次，使之混合均匀，即成10-2土壤稀释液。再用另一支吸管吸收10-2试管中土壤稀释液1ml，加入编号10-3无菌试管中，轻轻摇动，使之混合均匀，即成10-3土壤稀释液，一定要每次更换一支无菌吸管（连续稀释）。同法依次分别稀释成10-4、10-5和10-6等一系列稀释度菌悬液。2.平板制作将无菌培养皿编上10-3、10-4、10-5号码，每一号码设三个重复，用1ml无菌吸管按无菌操作要求吸10-5稀释液各1ml，分别放入编号10-5三个培养皿中。同法吸收10-5稀释液各1ml，分别放入编号10-4三个培养皿中。再吸收10-3稀释液各1ml，分别放入编号10-3三个培w1养皿中。然后在9个培养皿中分别倒入15ml已融化而且冷却至45℃左右牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝固后即成平板，整个操作过程应严格按照无菌操作。3.培养与移植待平板完全冷凝后，将平板倒置37℃恒温箱中培养24～48小时，检验分离结果。将培养后长出单个菌落分别挑取接种到牛肉膏蛋白胨培养基斜面上，然后置于37℃恒温箱中培养，待菌苔长出后，检验菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检验是否是单一微生物，若有其它杂菌混杂，就可再一次进行分离、纯化，直至取得纯培养。（二）稀释涂布平板法此法与稀释混合平板法基本相同，无菌操作也一样，所不一样是先将牛肉膏蛋白胨培养基融化，在火焰旁注入培养皿，摇匀后制成平板，然后用三支1ml无菌吸管分别由10-4、10-5、10-6三管土壤稀释液中各吸收0.2ml对号放入已写好稀释度平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，然后分别倒置于37℃温箱中培养后，再挑取单个菌落，直至取得纯培养。（三）平板划线分离法制备土壤稀释液细菌的分离接种和培养倾注平板培养挑菌落细菌的分离接种和培养细菌的分离接种和培养移接斜面惯用接种方法划线接种点接种穿刺接种涂布接种液体接种注射接种斜面接种时无菌操作(1)接种灭菌(2)开启棉塞(3)管口灭菌(4)挑起菌苔(5)接种(6)塞好棉塞纯化（平板划线法）倒平板——划线——培养——挑菌落——纯种（纯培养）细菌的分离接种和培养平板划线分离方法1.斜线法2.曲线法3.方格法4.放射法5.四格法五、微生物试验技术操作规范示例（一）斜面接种无菌操作技术细菌的分离接种和培养细菌的分离接种和培养细菌的分离接种和培养细菌的分离接种和培养(二）倒平板及平板划线接种（三）平板划线接种：细菌的分离接种和培养六、作业一、视频演示二、取自己做培养皿，观察，并作图三、挑取菌落，进行革兰氏染色，初步判别革兰氏阴性或阳性菌四、将自己培养皿、试管清洗洁净，放入抽屉五、作业：从土壤中分离细菌主要试验步骤。