用于肽环化和蛋白酶处理的方法和组合物.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107835871A(43)申请公布日2018.03.23(21)申请号201680036493.1(74)专利代理机构中国专利代理(香港)有限公司720(22)申请日2016.04.2201代理人梁谋黄希贵(30)优先权数据62/1520102015.04.23US(51)Int.Cl.C40B40/10(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2017.12.21(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2016/0589982016.04.22(87)PCT国际申请的公布数据WO2016/170107EN2016.10.27(71)申请人豪夫迈·罗氏有限公司地址瑞士巴塞尔(72)发明人T.阿尔伯特V.拉米切夫J.帕特尔L.古德里希权利要求书4页说明书57页序列表78页附图19页(54)发明名称用于肽环化和蛋白酶处理的方法和组合物(57)摘要本发明涉及肽微阵列、产生肽微阵列的方法和使用微阵列鉴定肽结合剂的方法。更具体地，本发明涉及肽微阵列、产生肽微阵列的方法和使用微阵列鉴定肽结合剂的方法，其中所述微阵列包含环状肽。本发明还涉及通过用蛋白酶处理微阵列上的肽来增加微阵列上环化肽的数量的方法。另外，本发明涉及在微阵列上产生线性和环状肽亚阵列的方法。CN107835871ACN107835871A权利要求书1/4页1.一种肽微阵列，其包含至少一种式I的环状肽其中每个R1、R2、R3和R4独立地是天然氨基酸侧链或非天然氨基酸侧链；每个R5和R6独立地是氢或N末端封端基团；每个R7独立地是-OH或C末端封端基团；Q选自羰基、天然氨基酸侧链和非天然氨基酸侧链；每个X和Y独立地选自键、与Z共价连接的天然氨基酸侧链和与Z共价连接的非天然氨基酸侧链；Z是包含选自酰胺键、二硫键、异肽键、1,2,3-三唑和任选取代的1,2-醌的部分的基团；L和L各自独立地是任选的二价连接基团或键；m是0至6的整数；n是0至6的整数；p是0至100的整数；q是0或1；r是0或1；t是0至100的整数；u是0或1；且*是连接至少一种环状肽与具有反应性表面的固体支持物的连接点，其中所述至少一种环状肽被固定至所述反应性表面，且其中所述至少一种环状肽是固定至所述反应性表面的肽群体的一部分，其中所述肽群体包含独立地选择的目标氨基酸序列。2.权利要求1的肽微阵列，其中Z包含选自以下的部分：酰胺键、2CN107835871A权利要求书2/4页其中v是0至6的整数，w是0至6的整数，且y是0至6的整数，且**是与所述环状肽的其余部分的连接点。3.权利要求1的肽微阵列，其中Z包含肽键，Q是羰基，q是0，r是1，且u是0。4.权利要求1的肽微阵列，其中L是6-氨基己酸。5.权利要求1的肽微阵列，其中L是CH2CH2。6.权利要求1的肽微阵列，其中t是0，且p是1至20的整数。7.权利要求1的肽微阵列，其中所述肽群体的目标氨基酸序列包含相同数量的氨基酸。8.权利要求1的肽微阵列，其中所述肽群体的目标氨基酸序列不含有甲硫氨酸氨基酸、半胱氨酸氨基酸、相同氨基酸的氨基酸重复或由组氨酸(H)-脯氨酸(P)-谷氨酰胺(Q)序列组成的氨基酸基序。9.一种产生肽微阵列的方法，所述肽微阵列包含至少一种式I的环状肽其中每个R1、R2、R3和R4独立地是天然氨基酸侧链或非天然氨基酸侧链；每个R5和R6独立地是氢或N末端封端基团；每个R7独立地是-OH或C末端封端基团；Q选自羰基、天然氨基酸侧链和非天然氨基酸侧链；每个X和Y独立地选自键、与Z共价连接的天然氨基酸侧链和与Z共价连接的非天然氨基酸侧链；Z是包含选自酰胺键、二硫键、异肽键、1,2,3-三唑和任选取代的1,2-醌的部分的基团；3CN107835871A权利要求书3/4页L和L各自独立地是任选的二价连接基团或键；m是0至6的整数；n是0至6的整数；p是0至100的整数；q是0或1；r是0或1；t是0至100的整数；u是0或1；且*是连接至少一种环状肽与具有反应性表面的固体支持物的连接点；所述方法包括使式II的官能化肽在引起Z形成的条件下反应的步骤其中R1、R2R3、R4、R5、R6、Q、L、L、m、n、p、q、r、t、u和*如对于式I所定义；每个R7独立地选自-OH、C末端封端基团和；每个R8独立地是天然氨基酸侧链或非天然氨基酸侧链；每个R9独立地是-OH或C末端封端基团；每个X独立地选自键、与Z共价连接的天然氨基酸侧链和与Z共价连接的非天然氨基酸侧链；每个Y独立地选自键、与Z共价连接的天然氨基酸侧链和与Z共价连接的非天然氨基酸侧链；Z和Z各自独立地选自键、-OH、氢、硫醇、胺、羧酸、酰胺、炔、叠氮化物、任选取代的