一种心肌肌钙蛋白I的检测试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号CN109239361B(45)授权公告日2022.02.08(21)申请号201811150480.4审查员刘彦宁(22)申请日2018.09.29(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN109239361A(43)申请公布日2019.01.18(73)专利权人迈克生物股份有限公司地址611731四川省成都市高新区百川路16号(72)发明人姚凯成刘东泽赵书阁(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君陈征(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书9页G01N33/543(2006.01)序列表1页附图1页(54)发明名称一种心肌肌钙蛋白I的检测试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明涉及一种心肌肌钙蛋白I的检测试剂盒及其制备方法。本发明公开的心肌肌钙蛋白I的检测试剂盒包括检测抗体以及示踪物标记的捕获抗体，所述捕获抗体为分别结合心肌肌钙蛋白I不同位点的两种单克隆抗体，所述检测抗体为心肌肌钙蛋白I的多克隆抗体。本发明通过筛选合适的心肌肌钙蛋白I免疫层析检测的捕获抗体、检测抗体及其组合，同时优化试剂盒的稀释液组分，显著提升了检测的灵敏度和线性范围，同时保证了准确性和精密度，可用于心肌肌钙蛋白I的高效检测。CN109239361BCN109239361B权利要求书1/1页1.一种心肌肌钙蛋白I的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试纸卡、反应液和稀释液，所述试纸卡包括如下组分：底板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜上含有检测抗体划线得到的检测线和异硫氰酸荧光素标记的BSA划线得到的质控线；所述检测抗体为心肌肌钙蛋白I的多克隆抗体；所述反应液中含有荧光微球标记的捕获抗体和荧光微球标记的异硫氰酸荧光素抗体；所述捕获抗体为分别结合心肌肌钙蛋白I不同位点的两种单克隆抗体，两种单克隆抗体与心肌肌钙蛋白I的结合位点分别为如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列的41‑49位和83‑93位；所述反应液中荧光微球标记的捕获抗体的制备方法包括如下步骤：将结合位点分别为如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列的41‑49位和83‑93位的两种心肌肌钙蛋白I单克隆抗体以质量比1:1混合后，加入至活化的荧光微球溶液中进行标记反应；所述稀释液包括如下组分：甘氨酸0.1～0.5mol/L，氯化钠0.1～1.0％，BSA1～2％，酪蛋白0.1～0.5％，海藻糖1～3％，吐温‑200.3～0.8％，PVP‑400.3～1.0％，ProClin‑3000.1～0.5％，pH7.0～7.5。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光微球掺杂稀土镧系元素中的一种或多种，所述荧光微球的粒径为100～300nm。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光微球携带氨基或羧基的化学基团修饰。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光微球为聚苯乙烯荧光微球、聚磷腈荧光微球、三聚氰胺甲醛荧光微球、脲醛树脂荧光微球、二氧化硅荧光微球中的任意一种。5.权利要求1～4任一项所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括反应液的制备和试纸卡的制备；所述反应液中荧光微球标记的捕获抗体的制备方法包括如下步骤：(1)荧光微球的活化；(2)将结合位点分别为如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列的41‑49位和83‑93位的两种心肌肌钙蛋白I单克隆抗体以质量比1:1混合后，加入至活化的荧光微球溶液中进行标记反应；(3)在步骤(2)得到的荧光微球标记的捕获抗体中加入BSA处理，终止标记反应，得到荧光微球标记的捕获抗体。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述试纸卡为将所述的样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫固定于底板上制备得到；所述硝酸纤维素膜的制备方法包括如下步骤：(1)检测线和质控线的制备：将所述检测抗体在硝酸纤维素膜上划线得到检测线；将异硫氰酸荧光素标记的BSA在硝酸纤维素膜上划线得到质控线；(2)将步骤(1)得到的包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜干燥备用。7.权利要求1～4任一项所述的试剂盒或权利要求5或6所述的制备方法在制备用于检测心肌肌钙蛋白I的试剂中的应用。2CN109239361B说明书1/9页一种心肌肌钙蛋白I的检测试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种心肌肌钙蛋白I的检测试剂盒及其制备方法。背景技术[0002]心肌肌钙蛋白I(CardiacTroponinI，cTnI)是心肌肌钙蛋白的亚单位，存在于心肌肌原纤维细肌丝上，是心肌细胞特有的结构蛋白。在正常情况下，血液中的cTnI含量很低，当发生心肌损伤时，cTnI迅速释放入血液中，致使血液中的cTnI含量增高。心肌细胞损伤3小时～5