一种用于实时荧光核酸扩增检测的微流控芯片及检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111073811A(43)申请公布日2020.04.28(21)申请号201911348208.1B01L3/00(2006.01)(22)申请日2019.12.24(71)申请人深圳市华迈生物医疗科技有限公司地址518000广东省深圳市宝安区松岗街道溪头社区工业四路2号C栋2021(72)发明人弥胜利李想黄嘉骏(74)专利代理机构深圳新创友知识产权代理有限公司44223代理人王震宇(51)Int.Cl.C12M1/38(2006.01)C12M1/34(2006.01)C12M1/12(2006.01)C12M1/00(2006.01)C12Q1/6844(2018.01)权利要求书2页说明书6页附图1页(54)发明名称一种用于实时荧光核酸扩增检测的微流控芯片及检测方法(57)摘要一种用于实时荧光核酸扩增检测的微流控芯片及检测方法，该芯片包括层叠压合的基底层和盖板层，盖板层设置有入液口，基底层设置有废液接收部、滤纸腔室、进样口、混合流道、清洗液注入部及反应液注入部，进样口连接盖板层的入液口，滤纸腔室具有透明区域，滤纸腔室内设置有用于吸附核酸的滤纸，滤纸腔室与进样口、废液接收部和清洗液注入部相连，并通过混合流道连接反应液注入部，清洗液注入部用于向滤纸腔室注入清洗液，反应液注入部用于提供含有引物和酶的反应液，经过混合流道后流入滤纸腔室。使用本发明能够极大地简化繁琐的人为操作，缩短实时荧光核酸扩增检测时间。CN111073811ACN111073811A权利要求书1/2页1.一种用于实时荧光核酸扩增检测的微流控芯片，其特征在于，包括基底层和盖板层，所述基底层与所述盖板层层叠压合，所述盖板层设置有入液口，所述基底层设置有废液接收部、滤纸腔室、进样口、混合流道、清洗液注入部以及反应液注入部，所述进样口连接所述入液口，所述滤纸腔室具有透明区域，所述滤纸腔室内设置有用于吸附核酸以进行核酸纯化浓缩的滤纸，所述滤纸腔室与所述进样口、所述废液接收部和所述清洗液注入部相连，并通过所述混合流道连接所述反应液注入部，待测样品通过所述进样口进入所述滤纸腔室，所述清洗液注入部用于向所述滤纸腔室注入清洗液，清洗后的废液流向所述废液接收部，所述反应液注入部用于提供含有引物和酶的反应液，经过所述混合流道后流入所述滤纸腔室，所述滤纸腔室用于核酸恒温扩增及荧光检测。2.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述清洗液注入部包括预埋清洗液腔室，所述预埋清洗液腔室通过设置有软阀的流道与所述滤纸腔室相连，所述预埋清洗液腔室在外力驱动下释放预埋的清洗液，冲破所述软阀以对所述滤纸腔室内的所述滤纸进行杂质清洗。3.如权利要求1或2所述的微流控芯片，其特征在于，所述反应液注入部包括预埋酶腔室和预埋引物腔室，所述预埋酶腔室和预埋引物腔室各自具有反应液入口，所述预埋酶腔室和所述预埋引物腔室的出口均连接所述混合流道，在外力驱动下流入所述预埋酶腔室和所述预埋引物腔室的反应液分别与预埋的引物和酶混合，再通过所述混合流道进行混合之后流至所述滤纸腔室，优选地，所述预埋酶腔室和所述预埋引物腔室对称设置。4.如权利要求3所述的微流控芯片，其特征在于，所述反应液注入部还包括预埋反应液腔室，所述预埋反应液腔室通过设置有软阀的两个流道分别连接所述预埋酶腔室和所述预埋引物腔室，所述预埋反应液腔室在外力驱动下释放预埋的反应液，冲破软阀并流入所述预埋酶腔室和所述预埋引物腔室。5.如权利要求1至4任一项所述的微流控芯片，其特征在于，所述滤纸通过胶粘或者机械卡槽的方式固定在所述滤纸腔室中，通过控制所述滤纸的直径来控制核酸吸附量。6.如权利要求1至5任一项所述的微流控芯片，其特征在于，所述基底层上设置有多个并列的所述滤纸腔室。7.如权利要求1至6任一项所述的微流控芯片，其特征在于，所述废液接收部包括废液出口或废液池，所述废液池连接所述盖板层上设置的废液通气孔。8.如权利要求1至7任一项所述的微流控芯片，其特征在于，所述基底层和所述盖板层的材料为聚氯乙烯(PVC)，聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)、聚苯乙烯(PS)、聚碳酸酯(PC)或ABS。9.一种实时荧光核酸扩增检测方法，其特征在于，使用如权利要求1至7任一项所述的微流控芯片来进行实时荧光核酸扩增检测，所述方法包括如下步骤：(1)从所述进样口注入待测样品到所述滤纸腔室，废液流向所述废液接收部；(2)从所述清洗液注入部注入清洗液到所述滤纸腔室，废液流向所述废液接收部；(3)从反应液注入部注入混合有引物和酶的反应液到所述滤纸腔室，流向滤纸，由所述滤纸吸附核酸，实现核酸纯化浓缩；(4)控制所述滤纸腔室的温度为37℃，在显微镜下观测反应物的荧光强度，并定量分析核酸浓度。10.如权利要求9所