一种高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112458026A(43)申请公布日2021.03.09(21)申请号202011470276.8A23K50/30(2016.01)(22)申请日2020.12.15A23L5/20(2016.01)C12R1/125(2006.01)(71)申请人江苏奥迈生物科技有限公司地址211200江苏省南京市白马现代农业高新技术产业园区(72)发明人孙育荣(74)专利代理机构南京利丰知识产权代理事务所(特殊普通合伙)32256代理人任立(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12N1/02(2006.01)A23K10/18(2016.01)A23K10/16(2016.01)A23K20/28(2016.01)权利要求书1页说明书7页(54)发明名称一种高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌及其应用(57)摘要本发明公开了一种高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌AM‑05菌株，该枯草芽孢杆菌AM‑05菌株是在感染赤霉病的小麦田间土壤中分离筛选发酵得到，该枯草芽孢杆菌应用在降解DON上稳定性好，降解率高。CN112458026ACN112458026A权利要求书1/1页1.根据权利要求1所述的高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌AM‑05，其特征在于：该枯草芽孢杆菌AM‑05菌株是在感染赤霉病的小麦田间土壤中分离筛选发酵得到。2.根据权利要求1所述的高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌AM‑05，其特征在于，该菌株的制备具体方法如下：（一）菌种的筛选（1）取感染赤霉病的小麦田间土壤，铲去表层5cm，取5～15cm处，用无菌器具采样，装入无菌的塑料袋或纸袋中扎好，采样后分离，振摇20‑25min，使土样与水充分混合，将细胞分散，放入盛有99ml无菌水三角瓶中，常压80度的水浴处理样品1小时后，取出；（2）用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，重复步骤，制成10‑2、10‑3、10‑4、10‑5不同稀释度的土壤溶液；然后用无菌吸管分别由10‑3、10‑4、10‑5三管土壤稀释液中各吸取0.2ml，滴在对应平板培养基表面中央位置，用无菌涂布器涂布，在室温下静置5‑10min，使菌液浸入培养基；（3）将步骤（2）的平板培养基倒置于30℃培养箱中培养1‑3d；（4）观察菌落表面粗糙不透明，呈污白色或微黄色，将这样的菌种单个菌落分别挑取少许细胞接种到种子培养基上，置于30°C的培养箱中培养，即得到待选的菌株；（5）对待选的菌株进行筛选，检测其呕吐毒素降解能力，筛选得到降解能力最高的菌株；（6）将菌种培养物支撑30%甘油管，放置在‑80℃冰箱内保藏，待用；（二）菌种的发酵取分离出的枯草芽孢杆菌AM‑05，经逐级发酵，加入15吨发酵罐，发酵48小时，喷雾干燥，得500亿/克左右的枯草芽孢杆菌AM‑05产品。3.根据权利要求2所述的高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌AM‑05，其特征在于：所述步骤（2）中培养基的配置方法：蛋白胨：10‑13g，酵母膏：4‑5g，NaCl：9‑12g，可溶性淀粉：1‑2g，琼脂：18‑20g，用蒸馏水定容至900‑1000mL，pH值为7.2‑7.6，封口后，于120‑125℃，高压灭菌21‑23min。4.根据权利要求2所述的高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌AM‑05，其特征在于：所述步骤（4）中培养基的配置方法：豆饼粉：10‑13g，玉米粉:1‑3g，Na2HPO4：2‑3g，(NH4)2SO4:0.8‑1.2g，NH4Cl：0.5‑1g，用蒸馏水定容至900‑1000mL，封口后，于120‑123℃，高压灭菌20‑22min。5.根据权利要求2所述的高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌AM‑05，其特征在于：所述步骤（二）逐级发酵时所需的发酵培养基按质量百分比计包括以下组分：豆饼粉：70‑80%，玉米粉:5‑10%，Na2HPO4：1‑2%，(NH4)2SO4：0.5‑1%，NH4Cl:0.5‑1%1g，CaCl2:1‑2%，α—淀粉酶：1‑2%，以上各组分之和为100%。6.根据权利要求1‑5中任一权利要求所述的枯草芽孢杆菌AM‑05在降解呕吐毒素中的应用，其特征在于：先将枯草芽孢杆菌AM‑05加入修饰膨润土中，再加入酵母细胞壁，即可得呕吐毒素专用脱毒剂呕吐灵，然后将脱毒剂呕吐灵与被呕吐毒素污染的饲料混合；按质量百分比计：枯草芽孢杆菌AM‑05：10‑30%，修饰膨润土：40‑60%，酵母细胞壁：5‑15%，以上各组分之和为100%。2CN112458026A说明书1/7页一种高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌及其应用技术领域[0001