一种干细胞转染的基因递送载体及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113082054A(43)申请公布日2021.07.09(21)申请号202110276713.0(22)申请日2021.03.15(71)申请人中国药科大学地址210009江苏省南京市鼓楼区童家巷24号(72)发明人姜虎林亓连玉王译邢磊(74)专利代理机构南京纵横知识产权代理有限公司32224代理人刘艳艳(51)Int.Cl.A61K35/28(2015.01)A61P25/00(2006.01)A61P35/00(2006.01)A61P43/00(2006.01)C12N15/87(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图3页(54)发明名称一种干细胞转染的基因递送载体及其制备方法和用途(57)摘要本发明公开了一种干细胞转染的基因递送载体及其制备方法和用途，具体涉及一种靶向内质网，规避不利于基因递送入核的胞内转运路径且实现有效的溶酶体逃逸，在核周部位响应干细胞内还原性微环境进行基因递送的载体。该基因递送载体由可响应干细胞内微环境降解的连接键，具备溶酶体逃逸功能的侧链和可靶向内质网的侧链组成，通过迈克尔加成反应进行共价连接构建，载体与DNA通过静电作用结合，经能量依赖的内吞方式进入细胞后，靶向内质网，同时规避可能造成基因损失的其他胞内转运途径且实现有效的溶酶体逃逸，在细胞核核周部位还原性微环境下实现降解，从而实现较高的干细胞基因递送效率。CN113082054ACN113082054A权利要求书1/1页1.一种干细胞基因递送载体，其特征在于，所述干细胞基因递送载体Xm‑linker‑Yn的化学结构如下：其中，m、n为正整数；linker表示能够响应干细胞内还原性微环境进行生物降解的连接键，X表示可结合基因同时具备溶酶体逃逸功能的侧链，Y表示可靶向内质网的侧链。2.根据权利要求1所述的干细胞基因递送载体，其特征在于，Xm‑linker‑Yn的合成路线如下：3.根据权利要求2所述的干细胞基因递送载体，其特征在于：化合物1选自N,N'‑双(丙烯酰)胱胺，N,N'‑双(丙烯酰)硒代胱胺。4.根据权利要求2所述的干细胞基因递送载体，其特征在于：所述的X‑NH2选自组胺、胍丁胺和精氨酸中的一种或者几种。5.根据权利要求2所述的干细胞基因递送载体，其特征在于：所述的Y‑NH2选自磺胺、4‑(2‑氨乙基)苯磺酰胺、4‑氨基‑N‑甲基苯磺酰胺中的一种或者几种。6.根据权利要求2所述的干细胞基因递送载体，其特征在于：所述的溶剂选自无水甲醇、无水二甲基亚砜中的一种。7.如权利要求1‑6任一项所述的干细胞基因递送载体在制备干细胞基因转染试剂中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，将所述的干细胞基因递送载体Xm‑linker‑Yn与基因共孵形成复合物Xm‑linker‑Yn/基因。9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，复合物Xm‑linker‑Yn/基因的制备方法包括：在干细胞基因递送载体Xm‑linker‑Yn中涡旋逐滴加入基因，在15℃‑35℃的温度中静置孵育15min以上，即得复合物Xm‑linker‑Yn/基因；和/或，所述基因为DNA、RNA，优选为DNA，包括GFP、P53、PDCD4。10.如权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述干细胞包括：脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、神经干细胞。2CN113082054A说明书1/4页一种干细胞转染的基因递送载体及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种干细胞转染的基因递送载体及其制备方法和用途，靶向内质网，规避不利于基因递送的胞内转运途径且实现溶酶体逃逸，并且响应干细胞内还原性微环境降解，在核周部位释放基因的基因递送的载体，在干细胞上实现低毒高效的基因递送。背景技术[0002]干细胞是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的未分化细胞，并且在体内长期存活，根据人体需求分化为多种细胞。由于干细胞免疫原性低，具有一定的归巢特性(如肿瘤、炎症部位以及损伤部位等归巢)，另外其所携带的基因可以在体内长期发挥作用。基于以上特性，以基因修饰后的干细胞在神经损伤、组织损伤以及肿瘤等对多种疾病的治疗中具有重要意义。因此，提高基因导入干细胞的效率将有助于促进干细胞基因治疗的发展。[0003]目前的基因递送方法主要包括物理方法以及基因递送载体。物理方法主要包括电穿孔、基因枪、显微注射等，但其对细胞造成的刺激较大，引起严重毒性；基因递送载体主要包括病毒载体和非病毒载体，病毒载体如慢病毒、腺病毒及逆转录病毒等，其转染效率较高，但是具有较高的免疫原性，基因整合引起致癌风险并且成本较高，因此病毒载体在干细胞基因递送中的应用受到限制；非病毒载体生物相容性好，安全性高且易于大规模生产，然而由于