一种重组促甲状腺激素受体蛋白、制备方法及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115925966A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202111107448.XC12N15/866(2006.01)(22)申请日2021.09.22C12N5/10(2006.01)(71)申请人厦门英博迈生物科技有限公司地址361000福建省厦门市海沧区新园路126号申请人厦门万泰凯瑞生物技术有限公司(72)发明人王海虹柯起沈邹梦雯庄翠真李丽华李惠萍陈伟彬柯少君张一非林秋敏宋浏伟熊君辉(74)专利代理机构厦门原创专利事务所(普通合伙)35101专利代理师郭金华(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C07K14/72(2006.01)权利要求书1页说明书10页序列表8页附图6页(54)发明名称一种重组促甲状腺激素受体蛋白、制备方法及应用(57)摘要本发明提供了一种重组促甲状腺激素受体蛋白、制备方法及应用，所述重组促甲状腺激素受体蛋白包括TSHR蛋白胞外段和TSHR蛋白胞内段，所述TSHR蛋白胞外段的C端连接在所述TSHR蛋白胞内段的N端。所述蛋白实现胞外可溶性表达、纯度高、活性高，稳定性好。CN115925966ACN115925966A权利要求书1/1页1.一种重组促甲状腺激素受体蛋白，其特征在于，包括TSHR蛋白胞外段和TSHR蛋白胞内段，所述TSHR蛋白胞外段的C端连接在所述TSHR蛋白胞内段的N端。2.根据权利要求1所述的重组促甲状腺激素受体蛋白，其特征在于，所述TSHR蛋白胞外段的氨基酸序列如SEQIDNO：12所示，所述TSHR蛋白胞内段的氨基酸序列如SEQIDNO：13所示。3.根据权利要求1所述的重组促甲状腺激素受体蛋白，其特征在于，其N端还连接外源性分泌信号肽。4.根据权利要求1所述的重组促甲状腺激素受体蛋白，其特征在于，所述TSHR蛋白胞内段的C端还连接纯化标记序列。5.一种根据权利要求1至4任一项所述重组促甲状腺激素受体蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，构建重组质粒，所述重组质粒包括TSHR蛋白的胞外段基因片段及TSHR蛋白的胞内段基因片段；所述TSHR蛋白胞外段的C端连接在所述TSHR蛋白胞内段的N端；S2，将重组质粒转入真核表达系统进行目的蛋白的表达和鉴定；S3，纯化目的蛋白。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述构建重组质粒的方法为先用重叠PCR方法将TSHR蛋白的胞外段基因片段及TSHR蛋白的胞内段基因片段连接成目的基因片段，再用Gibson克隆方法将目的基因片段构建到质粒载体上。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述构建重组质粒的方法为先化学合成包括TSHR蛋白的胞外段基因片段及TSHR蛋白的胞内段基因片段的目的基因片段，再将目的基因片段构建到质粒载体上。8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述真核表达系统选自杆状‑昆虫表达系统、CHO细胞表达系统、293细胞表达系统或酵母表达系统。9.一种权利要求1至4任一项所述的重组促甲状腺激素受体蛋白在促甲状腺激素受体抗体检测中的应用。10.一种促甲状腺激素受体抗体检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至4任一项所述的重组促甲状腺激素受体蛋白。2CN115925966A说明书1/10页一种重组促甲状腺激素受体蛋白、制备方法及应用技术领域[0001]本发明涉及一种重组促甲状腺激素受体蛋白、制备方法及应用，属于促甲状腺激素受体蛋白的制备技术领域。背景技术[0002]促甲状腺激素受体(TSHR)是存在于甲状腺滤泡细胞膜上的一种G蛋白偶联受体。在正常的生理情况下，TSHR通过与促甲状腺激素(TSH)的结合，通过腺苷酸环化酶(AC‑cAMP)通路和磷脂酶C‑二酰甘油及磷酸肌醇通路来调节甲状腺滤泡细胞生长、分化及功能。TSHR不仅介导TSH的生理作用，而且是一种重要的自身抗原，其相应的自身抗体，促甲状腺激素受体抗体(TSHRAb,TRAb)在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)的发生过程中起着重要作用。TRAb介导了自身免疫性甲状腺病的发生和发展，被认为是自身免疫性甲状腺疾病患者检测的重要指标。[0003]目前，TRAb的检测方法主要包括两类，一种是竞争法，一种是双抗原夹心法。竞争法主要是利用通过患者自身TRAb能和标记的重组人自身刺激型单克隆M22竞争结合TSHR的办法来定量TRAb,比传统的TRAb与TSH竞争结合TSHR有更高的灵敏度和更好的检测稳定性，也是目前主要的TRAb检测方法。另一种是双抗原夹心法是利用两种以上TSHR抗原夹心检测TRAb，目前该类型检测方法尚未在临床上广泛使用。以上不管采用任何一种检测方法，都需要通过TRAb与TSHR的结合来实现TRAb的定量，因此作为TRAb检测的关键原材料，TSHR能否满足临床