通过5’UTR序列变体修饰基因转录和翻译效率.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116179549A(43)申请公布日2023.05.30(21)申请号202211544617.0A61K38/20(2006.01)(22)申请日2022.12.02A61K39/12(2006.01)A61P35/00(2006.01)(30)优先权数据A61P31/20(2006.01)63/287,4842021.12.08USA61P17/12(2006.01)(71)申请人南京吉迈生物技术有限公司地址210016江苏省南京市江北新区华康路121号(72)发明人李宰宇王德华郝肖瑶高悦刘杰何珊何婷柴旦(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)C12N15/24(2006.01)C12N15/37(2006.01)C12N15/85(2006.01)C12N5/10(2006.01)权利要求书3页说明书18页序列表（电子公布）附图9页(54)发明名称通过5’UTR序列变体修饰基因转录和翻译效率(57)摘要本发明涉及mRNA疫苗、mRNA治疗和基因治疗领域，并且具体涉及使用含有5’UTR后接编码序列的基因表达载体或PCR扩增子用于体外和体内生产感兴趣的mRNA或蛋白质。CN116179549ACN116179549A权利要求书1/3页1.分离的核酸，其在5’至3’方向包含：a)至少一个5’UTR元件，所述5’UTR元件包含含有SEQIDNOs.1‑63,72‑84(优选SEQIDNOs.38,43,46,61或72)中任何一个的多核苷酸；和b)至少一个编码感兴趣的肽或蛋白质的开放阅读框(ORF)，优选地，所述感兴趣的肽或蛋白质是药用活性蛋白，优选选自下组：细胞因子(例如白介素(优选IL‑12或IL‑2或IL‑7))；例如促红细胞生成素；黏附分子，例如整联蛋白；免疫球蛋白；免疫活性化合物，例如抗原，例如肿瘤相关抗原、病原体相关抗原(例如，一种或更多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)病毒抗原，例如一种或更多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)人乳头瘤病毒(HPV)抗原、猴痘病毒抗原、流感病毒(A、B或C)抗原、CMV抗原或RSV抗原)、变应原或自身抗原；激素，例如加压素、胰岛素或生长激素；生长因子，例如VEGFA；酶，例如单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1‑TK)、氨基己糖苷酶、苯丙氨酸羟化酶、假胆碱酯酶、胰酶或乳糖酶；受体，例如生长因子受体；蛋白酶抑制剂，例如α1‑抗胰蛋白酶；凋亡调节剂，例如BAX；转录因子，例如FOXP3；肿瘤抑制蛋白，例如p53；结构蛋白，例如表面活性型蛋白质；重编程因子，例如OCT4、SOX2、c‑MYC、KLF4、LIN28或NANOG；基因组改造蛋白，例如成簇规律间隔短回文重复序列‑CRISPR‑相关蛋白9(CRISPR‑Cas9)；以及血蛋白，例如纤维蛋白原；优选地，所述白介素为hIL‑12；更优选地，所述hIL‑12编码序列包含SEQIDNO:69或65所示序列；优选地，所述HPV编码序列包含SEQIDNO:85所示序列。2.权利要求1所述的分离的核酸，其中所述分离的核酸还包含3’UTR元件(例如包含如SEQIDNO:87所示序列)和polyA序列。3.权利要求2所述的分离的核酸，其中所述分离的核酸包含SEQIDNO:68或SEQIDNO:86所示序列。4.mRNA，其在5’至3’方向包含：a)至少一个5’UTR元件，所述5’UTR元件包含含有SEQIDNOs.1‑63,72‑84(优选SEQIDNOs.38,43,46,61或72)中任何一个的多核苷酸；和b)至少一个编码感兴趣的肽或蛋白质的开放阅读框(ORF)；优选地，所述mRNA还包含3’UTR元件(例如包含如SEQIDNO:87所示序列)和polyA序列；优选地，所述感兴趣的肽或蛋白质是药用活性蛋白，优选选自下组：细胞因子(例如白介素(优选IL‑12或IL‑2或IL‑7))；例如促红细胞生成素；黏附分子，例如整联蛋白；免疫球蛋白；免疫活性化合物，例如抗原，例如肿瘤相关抗原、病原体相关抗原(例如，一种或更多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)病毒抗原，例如一种或更多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)人乳头瘤病毒(HPV)、猴痘病毒、流感病毒(A、B或C)抗原、CMV抗原或RSV抗原)、变应原或自身抗原；激素，例如加压素、胰岛素或生长激素；生长因子，例如VEGFA；酶，例如单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1‑TK)、氨基己糖苷酶、苯丙氨酸羟化酶、假胆碱酯酶、胰酶或乳糖酶；受体，例如生长因子受体；蛋白酶抑制剂，例如α1‑抗胰蛋白酶；凋亡调节剂，例如BAX；转录因子，例如FOXP3；肿瘤抑制蛋白