紫草素在口腔鳞癌NFκB信号通路中作用机制的研究.pdf

上海交通大学博士学位论文紫草素在口腔鳞癌NF-κB信号通路中作用机制的研究姓名：阮敏申请学位级别：博士专业：口腔临床医学（口腔颌面外科学）指导教师：张陈平20080501紫草素在口腔鳞癌．尤藕磐分凶饔没频难芯摘要抗肿瘤治疗一直是临床上的一大难题手术治疗对早中期的实体瘤效果较好但对晚期患者疗效相对较差；放化疗虽然有效但毒副作用较大；基因治疗前景很广但是离临床实际应用还有较长的距离；低毒高效的天然植物成分已经成为抗肿瘤治疗的新希望当今抗肿瘤药物发展战略之一即是从天然产物中寻找活性成分特别是与现代分子生物学的进展结合起来期望进一步提高肿瘤治疗效果。口腔鳞状细胞癌是一种侵袭性较强的头颈部上皮来源恶性肿瘤近年来在我国有发病率上升且发病年龄年轻化的趋势。尽管包括手术临床以提高口腔鳞癌尤其是晚期患者的生存率和生存质量极为重要。近年来大量研究表明由天然植物紫草中提取出的小分子化合物紫背景：放疗以及化疗在内的各种治疗手段都在不断的改进口腔鳞癌患者的五年生存率仍徘徊在％上下晚期患者则仅为ィ鹾笤斐傻墓能障碍和容貌破坏亦给患者带来了极大的心理负担和生活障碍。因此从天然植物中研究开发具有靶向性的低毒有效化学药物并最终应用于上海交通大学医学院级博士学位论文草素可以从多个层面上抑制肿瘤的发生、发展相对于目前临床应用的化学制剂其对人体的毒副作用较小可能成为一种新型的低毒高效抗肿瘤药物具有良好的发展应用前景。基于上述背景本研究拟通过实验观察并探讨紫草素靶向治疗口腔鳞癌的可行性及相关分子机制为口腔鳞癌的有效防治探索新的途径。观察紫草素在体外对口腔鳞癌细胞系增殖凋亡以及转移侵袭等生物学行为的影响重点研究一出信号通路及其下游调控分子的紫草素相关衍生物的合成改进及临床应用提供实验依据。方法：作用；采用光镜和透射电镜观察细胞形态结构的变化；采用流式细胞仪ü赴硕ㄒ剖笛椤⑾赴掣绞笛楹蚑侵袭实验观察目的：易搴虲家族在紫草素抗腔鳞癌过程中的参与机制为今后钥谇涣郯㏕．赴Q芯慷韵螅？谇徽衬は赴魑6照采用四甲基偶氮唑蓝ü鄄熳喜菟囟园┫赴奶逋庠鲋骋种分析细胞周期；采用傲魇较赴鸄疨旧ḿ觳庀胞凋亡情况。上海交通大学医学院级博宦畚过免疫细胞化学和酶联免疫吸附实验检测紫草素对置诤虴．蛋白表达的影响。采用免疫细胞化学法检测鞍椎亩ㄎ患氨泶铮捎媚呵ㄒ浦秃笫验检测．小的岷匣钚浴捎玫鞍子〖７细胞的增殖抑制作用呈现明显的时间和浓度依赖性电镜下可见典型的赴硕ㄒ剖笛椤⒄掣绞笛楹蚑侵袭实验显示紫草素对赴牡奶逋怵じ健⒃硕扒窒芰γ挥邢灾跋欤幻庖呦赴紫草素对细胞的体外黏附运动及侵袭能力的影响进一步通细胞捎玫鞍子〖７觳釯．磷酸化．蛋白的表达觳釨一癇蛋白的表达采用酶联免疫吸附方法治鲎喜菟丶胺篊抑制剂作用前后的活性。结果：甅结果显示在～／ǘ确段冢喜菟囟訲细胞核皱缩及凋亡小体碇悄旱缬竟鄄斓降湫吞葑刺醮式细胞仪定量分析结果显示亚期细胞明显增加各实验组细胞凋亡率均明显高于对照组。化学和酶联免疫吸附实验表明紫草素作用后细胞姆上海交通大学医学院级博士学位论文Ⅱ．细胞内．蛋白和鞍孜廾飨员浠姿峄甀出白的表达水平却明显降低；结果显示紫草素作用后．的细胞内蛋白的表达显著减少剂瓵．瓺则可以明显抑制紫草素引起的细胞增殖抑制及凋亡。喜菟囟钥谇涣郯┫赴礣．喜菟囟钥谇涣郯㏕．力及侵袭能力均无明显抑制作用对基质金属蛋白酶姆置谝喜菟氐挠盏伎谇涣郯┫赴蛲鲎饔弥辽俨糠滞ü种芅鲂藕泌无明显变化；猚鞍椎谋泶锼溆性龈咔魇疲攵哉兆橄啾任达到统计学上的差异。甒和免疫细胞化学的结果显示紫草素处理后的口腔鳞癌结合活性受到明显抑制。喜菟刈饔煤螅琓．．在紫草素诱导的细胞凋亡过程中被激活泛瓒结论：具有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用可用于口腔鳞癌化学防治的新尝试。细胞系的体外黏附能力、运动迁移能无明显影响但可以轻微的上调甤蛋白的表达有通过化学改型而达到抑制肿瘤细胞侵袭转移的潜力。通路活性来实现应用紫草素特异性的抑制口腔鳞癌中高激活状态的Ⅳ上海