转植酸酶和抗粘液病毒基因猪 (2).doc

密级:论文编号:中国农业科学院学位论文转植酸酶和抗粘液病毒基因猪环境安全评价EnvironmentSafetyAssessmentofappAandMx1CotransgenicPigs硕士研究生：辛磊磊指导教师：杨述林申请学位类别：农学硕士专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：转基因动物环境安全评价培养单位：北京畜牧兽医研究所研究生院提交日期2011年05月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationEnvironmentSafetyAssessmentofappAandMX1CotransgenicPigsMs.Candidate：XinLeileiAdvisor：YangShuLinMajor:AnimalGeneticsBreedingandReproductionSpecialty：SafetyAssesmentofTransgenicAnimalsMay2011独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知除了文中特别加以标注和致谢的地方外论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘允许论文被查阅和借阅可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目论文作者专业研究方向指导教师培养单位（研究所、中心）姓名职称单位专业签名评阅人答辩主席答辩委员会议记录（秘书）论文答辩时间地点54摘要转基因动物技术逐渐成熟并广泛应用于医药、生产、食品等研究领域为社会发展起到了巨大的促进作用。我国转基因动物的研究已获得了突破性的进展科研成果层出不穷生长快、抗病强和肉质好的转基因猪、牛、羊等动物逐渐问世。但是转基因动物可能对生态、环境产生影响也可能影响生物的多样性。转基因生物的安全性问题已成为社会关注的焦点并引起了社会的广泛讨论而焦点主要集中在生态环境、食品安全等方面。为研究转基因猪是否会对环境产生影响尤其是外源基因是否漂移到其它生物体基因组中本试验针对转基因猪安全评价中存在的关键问题开展转基因猪的环境安全评价技术研究。具体内容包括：外源基因检测过程中常用PCR方法的灵敏度、转基因猪与非转基因猪之间、转基因猪与环境微生物之间的基因漂移进行了研究为评价转基因猪的外源基因漂移风险提供了技术资料。PCR检测外源基因灵敏度为了验证PCR反应检测外源基因的灵敏度将已经整合外源基因浓度已知（2.49×109拷贝/μL）的质粒载体进行倍比稀释通过PCR方法扩增倍比稀释液中的外源基因结果显示：在10μL的PCR体系中对质粒中appA基因、CMV-appA基因、MX1基因、CMV-MX1基因可检测到的最低浓度为：2.4×103拷贝/μL、2.4×104拷贝/μL、2.4×102拷贝/μL、2.4×103拷贝/μL。转基因与非转基因猪之间基因漂移为了评价转基因猪与受体母猪之间是否会发生基因漂移在受体母猪分娩后采集10头受体母猪的胎盘样本在分娩2月后采集受体母猪的血液样品。提取了受体母猪的胎盘及血液中的DNA通过PCR方法检测胎盘和血液DNA均未检测到外源基因的存在；选择2月龄4头转基因阳性的母猪将其与4头日龄相近的普通大白母猪进行同栏饲养在同栏饲养3月、5月、7月时抽取普通大白猪的血液提取DNA并检测外源基因均未检测到外源基因的存在。证实在同栏饲养的7个月时间里转基因猪与普通猪之间并没有发生基因漂移。猪场中粪便及周围土壤中基因漂移为了评价转基因猪的外源基因漂移到肠道微生物或者环境微生物中的风险采集了4头转基因阳性猪粪