食品中纳他霉素的测定-浙江质量网.doc

浙江省质量技术监督局发布2008-08-07实施2008-07-07发布食品中纳他霉素的测定DeterminationoftheNatamycincapacityinfoodsDB33/T702-2008DB33浙江省地方标准ICS67.040C53前言本标准附录A为资料性附录。本标准由浙江省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：浙江方圆检测集团股份有限公司。本标准主要起草人：何乔桑、廖上富、黄丽英、刘敏芳。食品中纳他霉素的测定范围本标准规定了食品中纳他霉素测定的液相色谱法和液相色谱-串联质谱法。本标准适用于食品中纳他霉素的测定。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法第一法液相色谱法原理试样用甲醇水溶液提取固相萃取柱净化反相高效液相色谱测定保留时间定性外标法定量。试剂除另有规定外所有试剂均为分析纯水为GB/T6682规定的一级水。甲醇：色谱纯。提取液：甲醇＋水＝1＋9。纳他霉素标准样品：含量≥99%。纳他霉素标准储备溶液：精确称取0.0500g纳他霉素于50mL容量瓶中用甲醇溶解并定容至刻度纳他霉素含量为1.00mg/mL。纳他霉素标准工作溶液：移取一定量标准溶液（4.4）用流动相稀释成不同浓度的标准工作溶液。仪器液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。组织捣碎机。涡旋混合器。固相萃取装置。氮吹仪。高速台式离心机：转速≥12000r/min。固相萃取柱：OasisHLB（6mL200mg）或相当者使用前分别用10mL甲醇和10mL水预处理保持柱体湿润。测定步骤提取固态样品：称取2g试样(精确至0.01g)于50mL离心管中准确加入20.0mL提取液（4.2）涡旋混合2min于12000转/min离心10min移取l0.0mL上清液用于净化。液态样品：称取5g试样(精确至0.01g)用提取液（4.2）定容至50mL摇匀于12000转/min离心10min移取l0.0mL上清液用于净化。净化取上述提取液过固相萃取柱使提取液以≤2mL/min的流速通过用10mL水清洗固相萃取柱弃去流出液。用5mL甲醇洗脱收集洗脱液于试管中于40℃氮气吹干准确加入0.5mL流动相涡旋混合30秒过0.22μm滤膜待测。液相色谱条件色谱柱：C18柱5μm200mm×4.6mm或相当者；柱温：30℃；进样量：20µL；流动相：甲醇＋水=70＋30；流速：1mL/min；检测波长：304nm。测定按6.3液相色谱条件测定样品和标准工作溶液根据保留时间定性以色谱峰面积按外标法定量。纳他霉素标准溶液的液相色谱图参见附录A.1。结果计算样品中纳他霉素的含量按式（1）进行计算。式中：X──样品中纳他霉素的含量单位为毫克每千克（mg/kg）；c──色谱测试液中纳他霉素的浓度单位为微克每毫升（µg/mL）；V──样品定容体积单位为毫升（mL）；V1──总提取液体积单位为毫升（mL）；V2──净化用提取液体积单位为毫升（mL）；m──样品质量单位为克（g）。注：计算结果保留小数点后一位小数。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。检出限本方法最低检出浓度为0.5mg/kg。准确度在线性范围内添加不同浓度的回收率在80%～110%之间。第二法液相色谱-串联质谱法原理试样用甲醇水溶液提取固相萃取柱净化液相色谱-串联质谱法测定外标法定量。试剂同4。仪器和设备液相色谱-串联四极杆质谱仪配有电喷雾（ESI）离子源。其他仪器同5。测定步骤提取同6.1净化同6.2。用流动相适当稀释。测定液相色谱条件色谱柱：C18柱1.7μm50mm×2.1mm或相当者；柱温：30℃；进样量：10µL；流动相：甲醇＋水=60＋40；流速：0.2mL/min；质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；10.3.2.4雾化气（DesolvationGas）、锥孔气（ConeGas）为高纯氮气碰撞气为高纯氩气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；喷雾电压、去簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度；定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压和碰撞能量见表1。1纳他霉素的质谱参数定量离子对（m/z）定性离子对（m/z）采集时间（s）去簇电压（V）碰撞能量（V）666/503666/503