改进荧光光谱法研究药物与血清白蛋白的相互作用.pdf

第35卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第10期2(Xj7年10月ChineseJournalofAnalyticalChemist叮1415~1420改进荧光光谱法研究药物与血清白蛋白的相互作用谭韬黄锐夏之宁’(重庆大学化学化工学院重庆4以刃30)摘要为了解决蛋白与药物分子的荧光光谱相互作用分析存在的缺点采用小分子为荧光检测对象以血清白蛋白(SA)为碎灭剂研究了模拟生理条件(pH二7.4)下伯氨喳、十二烷基苯磺酸钠和西酞普兰与SA的相互作用。测得伯氨喳、十二烷基苯磺酸钠和西酞普兰与SA的结合常数凡分别为8.16xl了Umol、4.14x106Umol和6.08xro7仃mol。这种改进荧光光谱法能更准确和全面地表达出sA与药物的相互作用信息。通过紫外吸收光谱相互作用分析法对改进方法进行了验证。并推测出药物与蛋白之间存在一种”点对面”的作用方式。关键词荧光光谱法牛血清白蛋白相互作用伯氨唆西酞普兰十二烷基苯磺酸钠1引言血清白蛋白(sernmalbuminSA)在血液中起着重要的储存和转运作用能与许多内源性和外源性化合物结合川对药物在体内的代谢和分布产生很大影响。因此研究药物与sA的结合是药物动力学和临床药理学的重要内容〔’]。目前广泛采用以sA为检测对象的经典荧光光谱法【’一】进行sA与药物相互作用的研究。在人e、二280nm时sA的荧光主要来源于色氨酸(御)残基〔6」其荧光谱图反映出的主要是Trp残基的荧光信息。可以认为经典荧光光谱法用Trp残基荧光变化信息来代表整个SA与药物相互作用的信息可能是不全面的。一些有荧光的药物分子的荧光谱图所反映的信息是其整体分子性质的表达。所以以该小分子为检测对象考察相互作用体系中SA对该小分子荧光性质的影响就能获得二者准确且全面的相互作用信息。针对经典荧光光谱法的不足本研究提出了改进荧光光谱法。本研究以抗疟药伯氨喳、除蜻药十二烷基苯磺酸钠和抗抑郁药西酞普兰为研究对象分别用改进荧光光谱法、经典荧光光谱法和紫外光谱法研究了它们与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用考察了经典荧光光谱法与改进荧光光谱法获得的结合常数及热力学函数之间的差异通过紫外光谱对改进方法进行了验证并推测了药物与BSA之间的作用方式。2实验部分2.1仪器和试剂RF一301PC荧光分光光度计(日本岛津公司);UV2450紫外分光光度计(岛津苏州公司)。牛血清白蛋白(BsA纯度>98%Genview分装)加蒸馏水配制成lx10一4moFL储备液1一4℃保存;伯氨唆(primaquinePQ纯度>95%漂阳市永安热固性塑料有限公司)、十二烷基苯磺酸钠(sodiumdodecylbenzenesulfonateSDBS分析纯成都科龙试剂厂)和西酞普兰(cital叩ramCIT纯度>98.5%重庆莱美药物技术有限公司)均配制成lxlo一’m0FL储备液;配制20mmoFL磷酸盐缓冲液(含0.lmoULNaCIpH=7.0)。所用试剂均为分析纯;实验用水均为一次蒸馏水。2.2实验方法2.2.1经典荧光光谱法在一系列romL容量瓶中加人相同体积的BSA储备液再加人不同体积的碎灭剂(如小分子药物)储备液用