实验四复方丹参中丹参素的药物动力学研究.doc

4大鼠灌服复方丹参方后血清中丹参素的测定潘桂湘［基金项目］：国家重点基础研究规划项目(G199944054403)作者简介：潘桂湘(1976-)男硕士研究方向为药物分析。Tel：[phone]Email：[e-mail]张伯礼高秀梅（天津中医学院中医药研究中心天津300193）[摘要]目的：了解大鼠ig复方丹参方后水溶性成分的吸收情况建立大鼠血清中丹参素的含量测定方法。方法：采用液液萃取法对血清样品进行预处理以对羟基苯甲酸为内标甲醇-乙腈-0.5%醋酸（2.5：3.5：94）为流动相用高效液相色谱法于281nm检测。结果：大鼠ig复方丹参方后在血清中检测到丹参素用所建立的方法绘制了其经时血药浓度曲线；而原儿茶醛则未在血清中发现检测到的是一个保留时间稍前于原儿茶醛的未知化合物。结论：大鼠灌服复方丹参方后丹参素可经胃肠道吸收入血呈快吸收慢消除的过程。[关键词]复方丹参方；丹参素；高效液相色谱法；体内药物分析复方丹参方由丹参、三七及冰片组成具有活血化瘀理气止痛之功效是临床治疗冠心病、胸闷、心绞痛的常用中药处方。方中的化学成分根据其理化性质和药理作用的差异可将之分为丹参水溶性成分、丹参脂溶性成分和三七皂苷类成分三大类。丹参水溶性成分含有多种酚酸类化合物该类成分具有很强的抗脂质过氧化、抗血栓等作用[1]可能是复方丹参方中的主要活性部位。传统中药多为口服制剂其有效物质往往以血液为介质而输送到靶点产生作用。就此而言给药后的血清才是真正起作用的“粗的药物”[2]。所以中药的药效物质基础应该在给药后的血清组成中进行探讨[3]。虽然近年来国内对复方丹参方的研究较多但对该方药效物质基础进行深入探讨的研究则相对很少。通过研究复方丹参方动物给药后血清中的成分及其相应的药理作用则可以更直接地了解到复方中真正起作用的化学物质基础。所以本文对大鼠灌服复方丹参方后丹参水溶性成分的吸收状况进行了研究并建立了血清中丹参素的HPLC测定方法为进一步阐明其药效物质基础提供科学的依据。1材料与方法1.1材料仪器HP1100高效液相色谱仪G1311A-四元泵G1322A-脱气机G1316A-柱温箱1314A-UV可变波长检测器HPRev.A.0501化学工作站。试药甲醇、乙腈为色谱纯水为超纯水冰醋酸、乙酸乙酯为分析纯丹参素、原儿茶醛对照品（中国药品生物制品检定所）对羟基苯甲酸（化学纯）三氯醋酸（分析纯）复方丹参方药液（取丹参和三七提取物适量加蒸馏水配制成生药量比为10：6的药液）。动物SD大鼠雌雄各半体重(200±10)g北京维通利华实验动物中心提供。1.2色谱条件HypersilC18（5μm）4.6mm×250mm色谱柱甲醇-乙腈-0.5%醋酸（2.5：3.5：94）为流动相流速为1.0mL·min-1检测波长为281nm色谱图见图1。1.3样品的处理与测定精密量取血清样品1.0mL加入1%醋酸50μL内标溶液50μL10%三氯醋酸溶液200μL用涡旋混合器混旋1min12000r·min-1离心10min。将上清液转移至具塞尖底离心试管中用4mL乙酸乙酯旋涡混合提取1min3000r·min-1离心2min分取有机层于45℃水浴上通N2流挥干。临用前残渣用甲醇50μL溶解超声1min旋涡混合1min离心（12000r·min-1）10min取上清液10μL进样以内标工作曲线法[4]求算丹参素的血药浓度。1.4标准曲线的绘制1.4.1标准贮备液配制精密称取4.0mg丹参素于10mL容量瓶中用1%醋酸定容至刻度然后取适量用1%醋酸稀释成浓度为0.0160.040.080.160.240.8mg·mL-1的丹参素标准溶液。另精密称取4.1mg对羟基苯甲酸于10mL容量瓶中用1%醋酸稀释至刻度再取1mL稀释至10mL作为内标溶液。1.4.2标准曲线的制备精密量取空白血清样品1.0mL加入不同浓度的丹参素标准溶液50μL内标溶液对羟基苯甲酸50μL10%三氯醋酸溶液200μL按“1.3样品的处理与测定”方法进行处理与测定。以丹参素与内标物的峰面积比值（Y）为纵坐标丹参素浓度（X）为横坐标用最小二乘法进行线性回归。1.5给药方案与样品采集SD大鼠随机分组每组3只（即每个取样时间点3只）实验前12h禁食不禁水。除空白组大鼠外各组大鼠按2.5mL·100g-1剂量灌服复方丹参方药液。大鼠于灌服前和灌服后153045607590120180240360min心脏采血37℃水浴温孵后离心10min（3000r·min-1）分离血清。2结果2.1丹参素经时血药浓度测定结果取血清样品1.0mL按“1.3样品的处理与测定”进行操作得大鼠ig复方丹参方药液后丹参素的经时血药浓度结果见表1。表