沙门氏菌快速检测方法.pdf

测方法文稿归稿存档编号：［KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-沙门氏菌快速检测方法1试剂与仪器1.1所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000pL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针1.2仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅1.3所用试剂和培养基1.3.1缓冲蛋白腺水（BPW）培养基称取BPW培养基20.lg加入蒸镭水1L搅拌加热煮沸至完全溶解以90mL/瓶分装到各锥形瓶并于121°C灭菌15min冷至常温。1.3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液取TTB增菌液基础93.6g加入蒸懈水1L搅拌加热煮沸至完全溶解分装于锥形瓶中每瓶lOOmLc将锥形瓶放入灭菌锅中121°C灭菌20min；冷至30°C每lOOmL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面）混合均匀。2、操作步骤2.1配制BPW培养基（第一天）2.2培养基冷却至室温后对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟关灯60min后使用。（第一天）2.3预增菌（第一天）称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶并及时盖上盖子150rpm下振荡10min于36°C±1°C培养18h左右。2.4配制TTB增菌液（第一天）2.5增菌（第二天）2.5.1接种和培养轻轻摇动培养过的样品混合物移取ImL转种于9mLTTB增菌液内于42°C±1°C培养18h24h。2.5.2培养现象菌名生长状况TTB培养特征伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071良好静置后浑浊鼠伤寒沙门氏CMCC(B)50115良好静置后浑浊菌大肠埃希氏菌ATCC25922不生长静置后清亮2.6配制沙门氏菌显色培养基平板（第二天）2.6.1取瓶内干粉4.75g用lOOmL蒸懈水溶解可按比例扩大或者缩2.6.2混合加热至100°C搅拌加热至完全溶解冷却至50°C倒平板。2.6.3样品用画线或者涂布法接种37°C培养24小时。2.6.3观察菌落颜色：（第三天）菌名菌号生长状况培养特征品红色或者紫红色菌落伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071良好大肠埃希氏菌ATCC25922生长蓝-绿色菌落其他革兰氏阴性菌生长/不生长无色