抗菌肽基因工程表达技术研究进展.pdf

万方数据抗菌肽基因工程表达技术研究进展付登峰胡建和刘兴友抗菌肽是有机生物体用来抵御外来病原体入侵而产生的具有抗菌作用的一类小分子蛋白质是很多种生物先天性非特异性防御系统的重要组分。自世纪年代瑞典科学家却硬嫌贾蟹离得到第一个抗菌肽一天蚕素以来等嗣锹叫衷诶コ妗⒘狡芾唷⑺生动物、及包括人在内的哺乳动物甚至植物及细菌等广泛的生物谱中发现了余种抗菌肽龋。多数抗菌肽具有广谱抗细菌、真菌、病毒、原虫和抗肿瘤功能及独特的作用机理尤其对耐药菌株有明显的杀灭作用且不破坏生物体细胞、无免疫原性。众多研究结果表明抗菌肽极有可能成为抗菌、抗病毒及抗肿瘤药物的新来源具有广阔的应用前景。咕牡姆掷嗉袄丛根据抗菌肽的结构可将抗菌肽分为啵孩俚链无半胱氨酸目咕模蛴晌薰嬖蚓砬接的两段宦菪槌傻碾模焊美嗫咕陌ㄌ觳纤等；②富含某些氨基酸残基可分为富含某些氨基酸残基但不含目咕和富含半胱氨酸的抗菌肽两大类；③含一个二硫键的抗菌肽；④有两个或两个以上二硫键具有鄣结构的抗菌肽；⑤由其他已知功能较大的多肽衍生而来的具有抗菌活力的肽。一般而言抗菌肽可通过以下滞揪痘竦茫孩从生物体内直接提取纯化；②化学方法人工合成；③采用基因工程技术进行抗菌肽人丁表达。抗菌肽为生物体内诱导产生含量较低从生物体内直接提取难度大、效率低、对技术和成本的要求高难以规模化生产并且对于某些高等生物或人类抗菌肽生产而言也不现实。随着多肽及蛋白质化学结构的进一步阐明和多肽合成技术的产生人工合成具有生物活性的肽或肽段为抗菌肽的研究提供了很大方便。诸多研究结果表明由于抗菌肽分子较小化学合成的抗菌肽表现出与天然抗菌肽一致的生物学活性但化学合成的方法同样存在成本较高的问题限制了抗菌肽的推广应用。现代基因工程技术的发展使借助基因工程技术大规模制备抗菌肽成为可能。咕牡幕蚬こ瘫泶进行抗菌肽研究的表达体系包括真核和原核表达体系两种其中在原核表达体系中大肠杆菌表达体系最具有代表性；真核表达体系有小球藻表达体系、杆状病毒介导的昆虫表达系统、酵母表达体系其中酵母表达体系用的最多是真核表达体系的代表。大肠杆菌表达体系由于大肠杆菌系统对许多蛋白质有较强的耐受能力能较高水平地表达多种蛋白质使之成为表达许多外源蛋白质的首选表达系统所以大肠杆菌是应用于刈榧际醯闹要宿主细菌在抗菌肽的表达研究中也得到了充分的应用。等将人口一防御素基因插入到泄菇ㄈ诤媳泶镌靥澹为工程菌进行表达纯化后的蛋白质具有抗菌活性该研究结果表明应用基因工程技术可以大规模制备抗菌肽。捎么1遗传繁育年第卷第幽峡萍佳г憾锟蒲аг骸Ｐ孪摘要：抗菌肽是生物体用来抵御外来病原体入侵而产生的具有抗菌作用的一类小分子蛋白质是很多生物先天非特异性防御系统的重要组成部分具有抗生素无可比拟的优点是当前最为理想的抗生素替代品。实践表明基因工程抗菌肽表达技术是大量获得抗菌肽最为经济、科学的有效途径。抗菌肽的表达目前主要以大肠杆菌和酵母表达系统为主针对近年来抗菌肽开发的策略和实践作者对大肠杆菌表达系统和酵母表达系统进行了简要综述以期为抗菌肽的应用和推广提供参考。关键词：抗菌肽；基冈工程；原核表达；真核表达中图分类号：文章编号：·中国畜牧兽医文献标识码：作者简介：付登峰男河南人硕士生研究方向：家畜传染病学和分子病原学。通信作者：胡建和．河南人。副教授．硕士生导师研究方向：动物微生物学、免疫学和分子病毒学。猰甤收稿日期：——甧．万方数据达的方式在大肠杆菌中表达—〉贸晒Γ～霾煌馗葱蛄械拇1泶锾逑抵校个重复序列时蛋白质产量最高达到菌体总蛋白的．ィ相当于．疞湿菌。包涵体可完全溶疞的尿素三聚体形式的捎肗缀蜕追掷耄儆敏前匪獬啥懒⒌亩屉摹孙琦等成功构建了串联表达一原核表达系统并在甤。谐晒Ρ泶铮其表达产物具有与合成的和籈嗨频奶逋饪怪琢鱿赴钚浴：阽舻采用蛉诤媳泶锵低吃贓．中重组表达鸡的抗菌肽基因获得了理想的表达效果诱导蛋白表达量占细胞总蛋白的％并且大部分以包涵体的形式存在。纯化后检测其抗菌活性与提取抗菌肽相似说明有些抗菌肽在进行融合表达时不影响抗菌肽的抗菌活性。王桂荣等根据已发表的牛抗菌肽基因序列设计了一对引物用试剂盒提取乳牛新鲜子宫内膜总璕狿扩增将克隆的抗菌肽基因全长编码区的