幽门螺杆菌在NO压力下的巯基亚硝基化修饰及蛋白质组反.pdf

山东大学博士学位论文幽门螺杆菌在NO压力下的巯基亚硝基化修饰及蛋白质组反应特征姓名：曲伟申请学位级别：博士专业：病原生物学指导教师：贾继辉20090518构已将其列为嘀掳┮蜃印Ｓ拿怕莞司诙ㄖ参刚衬ず罂梢约せ钊幽门螺杆菌在压力下的巯基亚硝基化修饰及蛋白质组反应特征摘要专业：博士生：导师：病原生物学曲伟贾继辉教授幽门螺杆菌且且恢指锢际弦跣浴⒙莞俗吹奈需氧菌定植于人胃粘膜上皮细胞可导致慢性胃炎、消化性溃疡胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤及胃癌的发生年世界卫生组织国际癌症研究机体免疫系统包括局部性和全身性抗体反应、细胞介导的免疫反应等。临床资料力如果能够充分地理解它们对幽门螺杆菌的免疫杀伤作用就可以为新型抗幽门螺杆菌制剂的开发提供重要线索。效应分子它的痪ò彼岷铣赏揪队欣涤谝谎趸:厦的催化作用机体内的薪峁剐鸵谎趸:厦陀盏夹鸵谎趸:厦类。其中在感染、炎症以及一些生理状态下可表达于多种细胞。当表达后能持续生成大量的在机体的免疫过程中尤其是抗感染免疫中发挥重要的作用。因此是当今生物学和医学领域中比较热门的研究课题之一在微生物学领域的研究也十分活跃。众所周知半胱氨酸匣峁故轿狧在多种蛋白功能中发挥重要作用。与巯基之间形成共价键的过程被称为巯基亚硝基化修饰。这种修饰与多种生理和病理过程密切相关例如平滑肌舒张、神经递质传递和免疫防御等。及动物实验表明这些先天性和继发性免疫反应对幽门螺杆菌具有一定的清除能一氧化氮琋分子是具有抗菌作用和免疫调节活性的重要的山东大学博士学位论文目前比较常用的分析巯基亚硝基化蛋白质特征的方法是生物素转换法并借助抗体法或质谱技术来进一步研究发生巯基亚硝基化的蛋白质。将活性巯基进行亚硝基化修饰是损伤病原体的重要机制因此针对巯基亚硝基化的分析方法非常适合研究免疫分子对微生物的作用靶点。基因组学和蛋白质组学技术都是整体的高通量的生物技术体系它们的兴起推动了生命科学各个分支突飞猛进的发展。基因是遗传信息的携带者蛋白质才是全部生物功能的执行者由于转录后调控和翻译的影响水平的变化不能完全反映蛋白质丰度的变化。而蛋白质组学是在整体水平上高通量地对不同时间和空间发挥功能的特定蛋白质群体进行研究的技术体系已被证实是研究细菌应对各种环境压力的适应反应的有力工具。幽门螺杆菌的两个菌株生物信息学资源本研究应用生物素转换法和高通量的比较蛋白质组学方法分析了对幽门螺杆菌蛋白质的巯基亚硝基化修饰和幽门螺杆菌在压力下的蛋白质表达的变化情况旨在发现幽门螺杆菌抗逆生存的新机制。该课题主要研究内容及实验结果如下：一、一氧化氮对幽门螺杆菌菌体蛋白巯基亚硝基化修饰及其抑菌作用当幽门螺杆菌感染人体后它可以激活宿主的先天性和继发性免疫反应其中是一种重要的非特异性免疫效应分子目前尚无研究分析等活性氮类物质杂拿怕莞司囊志钚裕鳵对抗病原微生物的一个主要的作用机制是将重要生命蛋白的活性半胱氨酸氧化和亚硝基化使茵体蛋白功能弱化或丢失。然而杂拿怕莞司陌械鞍咨胁磺宄１臼笛槭状卧谔逋实验检测了对幽门螺杆菌的较强的抑菌和杀菌活性分析了幽门螺杆菌在应用供体处理后蛋白质发生巯基亚硝基化的情况。即将幽门螺杆菌的菌体蛋白质与孵育后用生物素转换法昙欠⑸匣窍趸的蛋白然后再进行纯化、凝胶电泳分离最后对巯基亚硝基化蛋白进行别为：伴侣分子及热休克蛋白⒛蛩孛窩腔⑼榛夤趸还原酶、和这初步揭示了杂拿怕莞司目赡艿虷的全基因组序列已经测序完成为了充分利用这些甌．势准āＣ魅返丶宋逯址⑸匣窍趸牡鞍字剩山东大学博士学位论文抑菌机制：通过对蛋白质的巯基亚硝基化修饰靶定、抑制细菌的抗氧化防御功能二、幽门螺杆菌在一氧化氮压力下的蛋白质组反应特征幽门螺杆菌具有多种策略逃逸先天性免疫反应经由揪逗铣傻腘等活性氮类物质是先天性免疫反应中的重要效应分子。然而幽门螺杆菌如何在幽门螺杆菌在亚硝基化压力下的蛋白质反应特征。利用比较蛋白质组学的方法筛理过程、抗氧化、一般性压力反应、毒力因子以及一些未知功能等。值得注意的是在我们所筛选到的蛋白质中一些蛋白质参与铁代谢综合相关的文献报道的结果推测它们很可能处在高铁携带调节元