【精选】实验三药物血浆蛋白结合率测定.ppt

实验三药物血浆蛋白结合率测定测定方法平衡透析法重氮化偶合比色测定法材料与试剂透析液（PBS）pH7.4的0.02M磷酸盐缓冲液鸡、兔各三只管状半透膜周长5cm长约12cm721分光光度计、离心机、天平注射器、广口瓶、烧杯、三角烧瓶、试管、试管架、漏斗、滤纸、丝线、注射器试剂的配制试剂的配制操作步骤3.将两端扎紧的半透膜置于盛有9.75ml透析液的30ml广口瓶中用袋两端线段调节袋内外液面4.加2.0ml透析液代替血浆于半透膜袋内作平衡时间对照样品以确定药物从袋内外自由扩散达到平衡所需时间。5.加所试磺胺药溶液0.25ml于各瓶袋外透析液中。注意：容积越小越好以免影响透析液的组成6.置广口瓶于冰箱中平衡透析时间约需60h左右。7.待透析平衡后吸出袋外透析液少许加等量磺基水杨酸试剂检查有无血浆蛋白漏出。如检查为阳性则该样品作废。8.取出半透膜用滤纸吸干袋外壁透析液小心解开透析袋使袋内血浆流入干净试管。9.用重氮化-偶合比色法测定袋内外溶液中磺胺药浓度取袋内外溶液各0.5ml加水15.5ml；加15%三氯醋酸4ml混匀静置2min过滤取试管3支各加入滤液5mL为测定管取试管3支加入空白对照液5mL为空白管取试管3支加入应用标准液5mL为标准管在以上各管中各加入0.1%亚硝酸钠溶液0.5mL混匀放置3min各加入0.5%氨基磺酸胺溶液0.5mL混匀放置2min各加入0.1%二盐酸N-（1萘基）-乙二胺溶液2.5mL充分混匀放置10min用721分光光度计在550nm波长处比色以空白管校正光密度到0点读取标准管和测定管光密度计算游离磺胺药物含量10.计算血浆蛋白结合率计算公式计算公式