γ‑聚谷氨酸的发酵工艺.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107287254A(43)申请公布日2017.10.24(21)申请号201710576817.7(22)申请日2017.07.14(71)申请人武汉乐阳生物科技有限公司地址430074湖北省武汉市东湖开发区高新大道666号武汉国家生物产业基地项目B、C、D、区研发楼B1栋(72)发明人彭伟曾庆茁李强陈治国俞彬洲(74)专利代理机构北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)11369代理人胡茵梦(51)Int.Cl.C12P13/02(2006.01)C12R1/125(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称γ-聚谷氨酸的发酵工艺(57)摘要本发明公开了一种γ-聚谷氨酸的发酵工艺，包括：S1：制备枯草芽孢杆菌种子液；S2：将枯草芽孢杆菌种子液接种于液态发酵培养基中，于37℃、120r/min摇瓶培养12-16h后，得发酵液；采用频率为10-20Khz且功率为5W/mL的超声波处理发酵液3-5min后，其中，所述超声波处理的具体步骤为：每超声30s后，间隔30s再次超声；将超声波处理得到的发酵液低温保存并加入肽聚糖冷冻胶囊，补料，再继续37℃、120r/min摇瓶培养96h；S3：对发酵液进行提取、纯化，得到γ-聚谷氨酸。本发明具有节省成本、产率高的优点，可广泛应用于微生物发酵技术领域。CN107287254ACN107287254A权利要求书1/2页1.一种γ-聚谷氨酸的发酵工艺，其特征在于，包括：S1：制备枯草芽孢杆菌种子液；S2：将枯草芽孢杆菌种子液接种于液态发酵培养基中，于37℃、120r/min摇瓶培养12-16h后，得发酵液；采用频率为10-20Khz且功率为5W/mL的超声波处理发酵液3-5min后，其中，所述超声波处理的具体步骤为：每超声30s后，间隔30s再次超声；将超声波处理得到的发酵液低温保存并加入肽聚糖冷冻胶囊，补料，再继续37℃、120r/min摇瓶培养96h；S3：对发酵液进行提取、纯化，得到γ-聚谷氨酸；其中，制备肽聚糖冷冻胶囊的具体的步骤为：S4：按质量比3:1将肽聚糖和魔芋粉混合，向其中投入质量为肽聚糖2倍的磁化水搅拌，以冷却速度3℃/min降至4℃，于磁场强度为0.45T的磁场环境保温保持静置24h，得肽聚糖混合液；S5：然后将肽聚糖混合液分装到多个淀粉胶囊壳内，其中每个淀粉胶囊壳盛装3g步骤s4得到的肽聚糖混合液；S6：再以冷却速度5℃/min将盛装肽聚糖混合液的淀粉胶囊壳冷却至-12℃，保温6h，得肽聚糖冷冻胶囊。2.如权利要求1所述的γ-聚谷氨酸的发酵工艺，其特征在于，所述液态发酵培养基的碳源浓度为10-15g/L。3.如权利要求2所述的γ-聚谷氨酸的发酵工艺，其特征在于，还包括补料工艺，所述补料工艺的具体步骤为：在S2中将发酵液低温保存后，添加补料维持发酵液中碳源浓度为40-60g/L。4.如权利要求3所述的γ-聚谷氨酸的发酵工艺，其特征在于，所述补料为甘油和麦芽糖的混合物。5.如权利要求3所述的γ-聚谷氨酸的发酵工艺，其特征在于，所述补料工艺的补料次数为两次；第一次补料时间为：在S2中将发酵液低温保存后；第二次补料与第一次补料的间隔时间为36-40h。6.如权利要求1所述的γ-聚谷氨酸的发酵工艺，其特征在于，发酵液低温保存并加入肽聚糖冷冻胶囊的具体步骤为：步骤一:制备预冷至-12℃的肽聚糖冷冻胶囊；步骤二:将发酵液在4℃静置20分钟后，在超净台中按1颗/15min向发酵液中逐步加入步骤一得到肽聚糖冷冻胶囊4颗，边加入边轻轻摇动；步骤三：将发酵液放置入20℃的培养箱静置20分钟；步骤四:将发酵液30°培养箱中静置20分钟。7.如权利要求1所述的γ-聚谷氨酸的发酵工艺，其特征在于，超声30s的具体步骤为：S7：采用频率为10Khz且功率为5W/mL的超声波发酵液2s；S8：采用频率为15Khz且功率为5W/mL的超声波发酵液3s；S9：采用频率为20Khz且功率为5W/mL的超声波发酵液15s；S10：采用频率为15Khz且功率为5W/mL的超声波发酵液5s；2CN107287254A权利要求书2/2页S11：采用频率为10Khz且功率为5W/mL的超声波发酵液5s。8.如权利要求4所述的γ-聚谷氨酸的发酵工艺，其特征在于，制备甘油和麦芽糖的混合物的过程为：S12：将质量份数为10的水预热至60℃，将质量份数为1的麦芽糖缓慢加入到水中，边加边搅拌至麦芽糖完全溶解后冷却到室温后抽滤，得到第一混合溶液；S13：将S12中得到的第一混合溶液与质量分数为1的甘油完全混合得到第二混合溶液，将第二混合溶液放置在37℃培养箱备用。3CN107287254A说明书1/5页γ-聚谷氨酸的发酵工艺技术领域[00