耐碱的溶藻弧菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110205305A(43)申请公布日2019.09.06(21)申请号201910401310.7(51)Int.Cl.(22)申请日2019.05.14C12N7/00(2006.01)A61K35/76(2015.01)(83)生物保藏信息A61P31/04(2006.01)CCTCCM20187672018.11.09CCTCCM20187662018.11.09CCTCCM20187682018.11.09(71)申请人菲吉乐科（南京）生物科技有限公司地址211100江苏省南京市江宁区科学园龙眠大道568号1号楼北楼2层(72)发明人乔欢陈海徐旭凌黄杰费文斌胡怿林何四龙丛郁(74)专利代理机构北京维正专利代理有限公司11508代理人沈淼刘乾帮权利要求书1页说明书21页序列表23页附图2页(54)发明名称耐碱的溶藻弧菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用(57)摘要本发明属于溶藻弧菌噬菌体的研发技术领域，具体涉及耐碱的的溶藻弧菌噬菌体及其组合物和试剂盒。所述溶藻弧菌噬菌体为溶藻弧菌噬菌体VAP21（VibrioalginolyticusphageVAP21），保藏编号为CCTCCNO:M2018768。还公开了该溶藻弧菌噬菌体、或者溶藻弧菌噬菌体组合物、或含有溶藻弧菌噬菌体或溶藻弧菌噬菌体组合物的试剂或试剂盒在杀灭和/或预防弧菌属微生物中的应用。本发明具有宿主范围较广，低浓度下依然对宿主菌具有高毒性；而且在非致病性细菌宿主上可较好增殖；可实现大规模工业生产。本发明能为噬菌体疗法的应用提供优良的菌株资源。CN110205305ACN110205305A权利要求书1/1页1.一种耐碱的的溶藻弧菌噬菌体，其特征在于，所述溶藻弧菌噬菌体为溶藻弧菌噬菌体VAP21（VibrioalginolyticusphageVAP21），保藏编号为CCTCCNO:M2018768。2.根据权利要求1所述裂耐碱的的溶藻弧菌噬菌体，其特征在于，所述溶藻弧菌噬菌体VAP21（VibrioalginolyticusphageVAP21）为烈性噬菌体，有一呈对称的头部和较长的尾部，头部为二十面体对称，长径L为60～70nm,横径W为60～70nm，L/W≈1；尾部包括可收缩的肌鞘和尾丝，肌鞘长度为30～40nm，宽5～10nm,尾丝具有2～3根；最适pH为pH7～pH11，4℃～65℃条件下具有耐性，MOI=0.01条件下培养8～10h，其效价为2.5×1010pfu/mL。3.根据权利要求1所述耐碱的的溶藻弧菌噬菌体，其特征在于，所述溶藻弧菌噬菌体VAP21（VibrioalginolyticusphageVAP21）具有SEQIDNo.1所示的核苷酸序列。4.一种含有权利要求1～3任一项所述耐碱的的溶藻弧菌噬菌体的组合物，其特征在于，所述组合物含有所述溶藻弧菌噬菌体VAP21（VibrioalginolyticusphageVAP21）以及其它弧菌噬菌体中的至少一种。5.一种含有权利要求4所述耐碱的的溶藻弧菌噬菌体的组合物，其特征在于，所述组合物含有溶藻弧菌噬菌体VAP21（VibrioalginolyticusphageVAP21），溶藻弧菌噬菌体VAP9（VibrioalginolyticusphageVAP9）保藏号为CCTCCNO:M2018766；和溶藻弧菌噬菌体VAP7（VibrioalginolyticusphageVAP7）保藏号为CCTCCNO:M2018767中的两种或两种以上；以上噬菌体均于2018年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，分类命名均为Vibrioalginolyticusphage。6.根据权利要求4所述耐碱的的溶藻弧菌噬菌体的组合物，其特征在于，所述组合物包括溶藻弧菌噬菌体VAP21（VibrioalginolyticusphageVAP21），还包括各噬菌体突变体中的一种或多种；优选的，所述突变体至少90％与对应的弧菌噬菌体的天然序列相同。7.一种含有权利要求5所述耐碱的的溶藻弧菌噬菌体或溶藻弧菌噬菌体组合物的试剂或试剂盒。8.权利要求1～3任一项所述耐碱的的溶藻弧菌噬菌体、或者权利要求4所述的溶藻弧菌噬菌体组合物、或权利要求7所述的含有溶藻弧菌噬菌体或溶藻弧菌噬菌体组合物的试剂或试剂盒在杀灭和/或预防弧菌属微生物中的应用：所述弧菌属微生物包括溶藻弧菌V.alginolyticus、鳗弧菌V.anguillarum、霍乱弧菌V.cholerae、非O1群霍乱弧菌non-O1V.cholerae、费氏弧菌V.fischeri、河流弧菌V.fluvialis、哈维氏弧菌V.harveyi、病海鱼弧菌V.ordalii、副溶血弧菌V.pa