一种新型人源化抗CD20单克隆抗体.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN102190728102190728B(45)授权公告日2014.07.02(21)申请号201010150303.3A61P7/04(2006.01)(22)申请日2010.03.17A61P21/04(2006.01)A61P13/12(2006.01)(73)专利权人永卓博济(上海)生物医药技术有A61P19/04(2006.01)限公司A61P29/00(2006.01)地址201203上海市浦东张江高科技园区蔡(56)对比文件伦路333号2号楼306室CN1958615A,2007.05.09,(72)发明人刘劼张永克审查员李宁(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人王学强(51)Int.Cl.C07K16/28(2006.01)C12N15/13(2006.01)C12N15/85(2006.01)C12N1/15(2006.01)C12N1/19(2006.01)C12N1/21(2006.01)C12N5/10(2006.01)A61K39/395(2006.01)A61P35/02(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书17页说明书17页A61P37/02(2006.01)序列表11页序列表11页附图7页附图7页(54)发明名称一种人源化抗CD20单克隆抗体(57)摘要本发明公开了一种人源化抗CD20单克隆抗体的设计及制备方法，相关基因，蛋白质序列以及该抗体应用。与鼠抗及人鼠嵌合抗体相比，该人源化抗CD20抗体既保留或提高了可变区的高亲和性，又减低了嵌合抗体的免疫原性，从而达到减少药物副作用，改善临床治疗效果。本发明所述抗体在动物细胞中高效表达，可用于工业化生产。对B细胞淋巴瘤，白血病和与B细胞有关的自身免疫病有广泛应用前景。CN102190728BCN102978BCN102190728B权利要求书1/1页1.一种人源化抗CD20抗体，其可变区序列为下述之一：1）SEQIDNO：15所示的重链可变区序列和SEQIDNO：34所示的轻链可变区序列；2）SEQIDNO：16所示的重链可变区序列和SEQIDNO：34所示的轻链可变区序列；3）SEQIDNO：15所示的重链可变区序列和SEQIDNO：35所示的轻链可变区序列；4）SEQIDNO：16所示的重链可变区序列和SEQIDNO：35所示的轻链可变区序列；5）SEQIDNO：36所示的重链可变区序列和SEQIDNO：37所示的轻链可变区序列。2.如权利要求1所述抗体，它还含有人IgG1重链恒定区和人κ轻链恒定区。3.一种DNA分子，它编码上述权利要求1或2所述抗体。4.一种用于哺乳动物细胞转录表达的表达载体，是病毒的或非病毒的,它含有编码权利要求1或2所述抗体的DNA分子。5.一种宿主细胞，它含有权利要求4所述载体。6.一种组合物，它含有权利要求1或2所述抗体以及药学上可接受的辅料制成的制剂，用于对B细胞淋巴瘤，白血病和与B细胞有关的多种自身免疫病的临床治疗。7.一种制品，包含一种容器以及容器中的组合物，所述组合物为权利要求6所述的组合物。8.权利要求1或2所述的人源化抗CD20抗体在制备治疗CD20阳性B细胞淋巴瘤、B细胞性慢性淋巴细胞白血病、自身免疫病的药物中的用途。9.如权利要求8所述用途，所述自身免疫病为急性特发性血小板减少性紫癜、慢性特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、狼疮性肾炎、红斑狼疮或类风湿性关节炎。2CN102190728B说明书1/17页一种人源化抗CD20单克隆抗体技术领域[0001]本发明属于生物医药领域，具体的，本发明涉及单克隆抗体人源化技术,基因重组技术及抗体的表达制备。与鼠抗，人鼠嵌合抗体和其他人源化抗体相比，本发明所涉及的新型人源化抗CD20单克隆抗体进一步降低了抗体的免疫原性，同时保持了良好的抗原识别活性和体内体外抗瘤功能，有更好的临床应用前景。背景技术[0002]CD20属于MS4A蛋白家族，有四个跨膜区域，C端和N端位于细胞膜内，分子量约为35kDa(Cragg,etal,Curr.Dir.Autoimmun.8:140–174)。CD20作为B淋巴细胞表面膜蛋白,与B淋巴细胞Ca2+的跨膜传导密切相关,对B淋巴细胞的增殖和分化具有调节作用。CD20仅在前-B淋巴细胞、未成熟B淋巴细胞、成熟B淋巴细胞、激活B淋巴细胞中表达,而在浆细胞、淋巴多能干细胞以及其它组织均无CD20的表达。CD20的自然配体尚未明确。由于CD20在90%以上B细胞非何杰金氏淋巴瘤高度表达(Blood63(6):1424-1433,1984)，因此CD20成为B细胞淋巴瘤抗体治疗的一个很好靶点。抗CD20单克隆抗体在体