麻疯树籽粕毒蛋白的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102260337A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102260337A(43)申请公布日2011.11.30(21)申请号201010180764.5(22)申请日2010.05.24(71)申请人丹阳市春润生物能源有限公司地址212300江苏省丹阳市延陵镇柳茹村三草庵(72)发明人姚新华陈新华姚陈名(74)专利代理机构南京众联专利代理有限公司32206代理人顾进(51)Int.Cl.C07K14/415(2006.01)C07K1/36(2006.01)C12P21/06(2006.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称麻疯树籽粕毒蛋白的制备方法(57)摘要本发明提供一种麻疯树籽粕毒蛋白的制备方法，涉及蛋白分离和纯化领域。该制备方法为：将麻疯树籽进行粉碎挤压膨化预处理后，进行脱脂；采用复合植物水解酶对脱脂麻疯树籽粕进行酶解，然后采用高温淀粉酶进行酶解，离心取得沉淀；向沉淀中加入蛋白复合提取剂进行提取，除去残渣后获得的麻疯树籽粕毒蛋白粗提液分别通过截留分子量为30kDa和浓缩膜分子量为20kDa的超滤膜，获得分子量小于30kDa大于20kDa浓缩液，然后经脱盐柱脱盐、脱色后冷冻干燥得到麻疯树籽粕毒蛋白。本发明节生产工艺简单，变废为宝，制备条件温和，不涉及用强酸和强碱对其进行处理，对环境友好，生产成本低，适于大规模的工业化生产。CN102637ACCNN110226033702260350A权利要求书1/1页1.一种制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法，包括如下步骤：(1)将晒干的麻疯树籽进行粉碎，获得粉碎的麻疯树籽粕，其粉碎粒径为100μm～600μm。(2)将粉碎的麻疯树籽粕挤压膨化预处理后，用正己烷进行脱脂，获得脱脂麻疯树籽粕。(3)采用复合植物水解酶对脱脂麻疯树籽粕进行酶解，获得的产物采用高温淀粉酶进行酶解，然后离心取得沉淀。(4)按照固液质量比为1∶5～1∶30向步骤(3)所述沉淀中加入蛋白复合提取剂进行提取，除去残渣后获得麻疯树籽粕毒蛋白粗提液。(5)麻疯树籽粕毒蛋白粗提液分别通过截留分子量为30kDa和浓缩膜分子量为20kDa的超滤膜，获得分子量小于30kDa大于20kDa浓缩液，然后经脱盐柱脱盐、脱色后冷冻干燥得到麻疯树籽粕毒蛋白。2.根据权利要求1所述制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法，其特征在于步骤(3)中所述复合植物水解酶的酶解条件为：复合植物水解酶的加入量为所述脱脂麻疯树籽粕质量的2％～5％，酶解温度40℃～65℃，酶解的pH为4～6，酶解时间1h～3h。3.根据权利要求1或2所述制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法，其特征在于步骤(3)所述高温淀粉酶酶解条件为：高温淀粉酶的加入量为脱脂麻疯树籽粕质量的1％～4％，酶解温度80℃～95℃，酶解的pH为5.5～7.5，酶解时间1h～3h。4.根据权利要求3所述制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法，其特征在于步骤(3)中所述植物复合水解酶与高温淀粉酶的总质量为脱脂麻疯树籽粕质量的2.5％，所述植物复合水解酶与高温淀粉酶质量比2∶1；植物复合水解酶酶解时间2h，酶解温度为50℃，酶解pH为4.5；高温淀粉酶酶解时间1h，酶解温度为90℃，pH为7.0。5.根据权利要求4所述制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法，其特征在于所述蛋白复合提取剂提取的条件是：提取温度为15℃～80℃，提取时间为10min～180min，提取1～5次。6.根据权利要求5所述制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法，其特征在于步骤(4)所述沉淀在提取前，经过粉碎。7.根据权利要求6所述制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法，其特征在于提取条件为提取温度为60℃，提取时间为120min，沉淀粉碎后的粒度为60目，固液比为1∶9。8.根据权利要求7所述制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法，其特征在于步骤(5)中的超滤条件为超滤时间为55min，超滤压力为0.14MPa，超滤温度为65℃，超滤液浓度为3mg/ml。2CCNN110226033702260350A说明书1/4页麻疯树籽粕毒蛋白的制备方法技术领域[0001]本发明涉及蛋白分离和纯化领域，具体涉及一种制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法。背景技术[0002]肿瘤是严重危害人类健康的恶性疾病，我国每年死于肿瘤疾病的患者有100多万人，目前，已成为我国城市人口死亡的首要因素。抗肿瘤药物市场是仅次于心血管和中枢神经系统药物市场的全球第三大药物市场，目前发展迅速，2007年全球销售额为400亿美元，2010年预期将增至600亿美元，年增长率逾10％，在中国更是以17％的速度增长，而我国抗肿瘤药物市场的增速一直高于医药行业的增速，预计未来我国抗肿瘤行业复合增长率将为26％。尽管抗肿瘤药物的市场需求大，然而，大多数化疗药属合成化合物，靶向性