一种复合分子及其制备方法和药物组合物.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102453066A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102453066A(43)申请公布日2012.05.16(21)申请号201010518070.8(22)申请日2010.10.19(71)申请人南开大学地址300071天津市南开区卫津路94号申请人昆山市工业技术研究院小核酸生物技术研究所有限责任公司(72)发明人席真曹力强(74)专利代理机构北京润平知识产权代理有限公司11283代理人王崇陈小莲(51)Int.Cl.C07H21/00(2006.01)C07H21/02(2006.01)C07H1/00(2006.01)A61K31/713(2006.01)A61K48/00(2006.01)权利要求书权利要求书4页4页说明书说明书2121页页附图附图99页(54)发明名称一种复合分子及其制备方法和药物组合物(57)摘要提供了一种稳定性好且血液容留时间长的复合分子及其制备方法和应用。所述复合分子含有两条至少80％互补的核酸链X1和X2，X1的5’端与X2的3’端通过连接基团L1连接和/或X2的5’端与X1的3’端通过连接基团L2连接。本发明提供的复合分子的两条核酸链X1和X2的5’端和/或3’端通过如式1所示的连接基团连接，因此核酸链不容易解旋降解，从而大大地改善了核酸的稳定性和血液容留时间。所述复合分子施用后，在细胞内，利用细胞内存在的Dicer酶释放复合分子中被锁定的核酸，从而释放的双链核酸发挥其作用，例如siRNA对靶基因的表达进行抑制。CN1024536ACN102453066A权利要求书1/4页1.一种复合分子，该复合分子含有两条至少80％互补的核酸链X1和X2，X1的5’端与X2的3’端通过连接基团L1连接和/或X2的5’端与X1的3’端通过连接基团L2连接，其特征在于，所述连接基团L1和L2各自独立地如式1所示：-R1-S-R2-S-R3-式1在式1中，R1和R3各自独立地表示碳原子数为1-20的任选取代的亚烷基；R2如式2、式3或式8所示：式2式3式8在式2、式3或式8中，R4表示碳原子数为1-20的任选取代的亚烷基或碳原子数为6-20的任选取代的亚芳基；R5和R14各自独立地表示氢或碳原子数为1-20的任选取代的烷基；R6、R7、R8和R9各自独立地表示单键、氢、卤素或碳原子数为1-20的任选取代的烷基，并且R6、R7、R8和R9中的一者表示单键，剩余的三者中的至少一者为氢，并且当剩余的三者中的一者为氢时，氢和单键不位于同一个碳原子上；R10、R11、R12和R13各自独立地表示单键、氢、卤素或碳原子数为1-20的任选取代的烷基，并且R10、R11、R12和R13中的一者表示单键，剩余的三者中的至少一者为氢，并且当剩余的三者中的一者为氢时，氢和单键不位于同一个碳原子上。2.根据权利要求1所述的复合分子，其中，R2如式3所示。2CN102453066A权利要求书2/4页3.根据权利要求1或2所述的复合分子，其中，R4表示碳原子数为1-20的亚烷基。4.根据权利要求3所述的复合分子，其中，R4表示碳原子数为1-6的亚烷基。5.根据权利要求1或2所述的复合分子，其中，R1和R3各自独立地表示碳原子数为1-10的亚烷基。6.根据权利要求1或2所述的复合分子，其中，核酸链X1和X2为DNA链或RNA链，核酸链X1或X2具有15-50个碱基。7.复合分子的制备方法，该方法包括以下步骤：(1)提供包括至少80％互补的第一修饰核酸链和第二修饰核酸链的双链核酸，其中第一修饰核酸链的5’端具有基团-R19-SH且第二修饰核酸链的3’端具有基团-R20-SH，并且第二修饰核酸链的5’端具有基团-R21-SH且第一修饰核酸链的3’端具有基团-R22-SH，其中，R19、R20、R21和R22各自独立地表示碳原子数为1-20的任选取代的亚烷基；(2)提供式4、式5或式9所示的化合物；(3)将所述双链核酸与式4、式5或式9所示的化合物进行迈克尔加成反应，式4式5式9在式4、式5或式9中，R4表示碳原子数为1-20的任选取代的亚烷基或碳原子数为6-20的任选取代的亚芳基；R5和R14各自独立地表示氢或碳原子数为1-20的任选取代的烷基；R15和R16各自独立地表示氢、卤素或碳原子数为1-20的任选取代的烷基；3CN102453066A权利要求书3/4页R17和R18各自独立地表示氢、卤素或碳原子数为1-20的任选取代的烷基。8.根据权利要求7所述的制备方法，其中，在步骤(3)中，迈克尔加成反应的条件包括：在碱性催化剂的存在下，在反应介质中进行，双链核酸与式4或式5所示的化合物的摩尔比为1∶500-2000，双链核酸在反应介质中的浓度为20-200μmol/L，反应温度为10-60